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《丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心法的應(yīng)用研究-論文.pdf》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、·98·中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥2014年4月第9卷第12期ChinaPracMed，Apr2014，Vo1．9，No．12丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心法的應(yīng)用研究時(shí)慧挺【摘要】目的對(duì)丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心法的I床應(yīng)用效果進(jìn)行分析探討，為今后的臨床工作提供可靠的參考依據(jù)。方法采集230份血液篩查結(jié)果為陰性標(biāo)本和230份質(zhì)控血液標(biāo)本，對(duì)其采取雙抗原夾心法展開(kāi)丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果本組138份HCV抗體陽(yáng)性標(biāo)本中經(jīng)雙抗原夾心法檢出136份，有2例未檢出，敏感性為98．55％。結(jié)論采取雙抗原夾心法對(duì)HCV抗體進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)
2、果準(zhǔn)確可靠，敏感性較高，臨床優(yōu)勢(shì)顯著，值得關(guān)注并推廣。【關(guān)鍵詞】丙型肝炎病毒抗體；雙抗原夾心法；臨床應(yīng)用丙型肝炎病毒(HCV)為通過(guò)血液或者是血液制品進(jìn)行傳確認(rèn)試劑檢測(cè)證實(shí)這2份標(biāo)本均為陽(yáng)性，雙抗原夾心法檢測(cè)播的一種病毒，在輸血過(guò)程中丙型肝炎病毒傳染為一個(gè)無(wú)法敏感性為98．55％。詳見(jiàn)表1。忽視的途徑，已經(jīng)受到了廣大醫(yī)學(xué)工作者和患者的重視。流表1雙抗原夾心法與ChironRIBA確認(rèn)試劑檢測(cè)結(jié)果比較行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示HCV感染的發(fā)生率較高，分布較廣，出于對(duì)輸血引起HCV傳播進(jìn)行控制的目的，臨床需對(duì)獻(xiàn)血者展開(kāi)抗一HCV檢測(cè)J。本次研究中
3、出于對(duì)丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心法的臨床應(yīng)用效果進(jìn)行分析探討的目的，對(duì)2303討論份陰性血液標(biāo)本和230份質(zhì)控血液標(biāo)本展開(kāi)了相關(guān)檢測(cè)，并流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示_2J，HCV感染表現(xiàn)出顯著的世對(duì)其檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)匯報(bào)如下。界性分布，在我國(guó)HCV感染者約有4OOO萬(wàn)，血液傳播為其1資料與方法主要傳播途徑，其中輸血為血液傳播的一種主要形式，因此1．1一般資料標(biāo)本來(lái)源于2012年1月～2013年12月間在對(duì)HCV感染血液傳播進(jìn)行有效控制的過(guò)程中，臨床需對(duì)本院血液篩查陰性標(biāo)本，抽取其中的230份作為研究對(duì)象，獻(xiàn)血者展開(kāi)抗一HCV檢測(cè)?，F(xiàn)
4、階段采取酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)對(duì)另收集230份質(zhì)控標(biāo)本?？挂籋CV抗體進(jìn)行檢測(cè)為臨床診斷HCV感染的主要手段。在1．2方法實(shí)施抗一HCV酶聯(lián)免疫診斷時(shí)所需試劑均為二抗作酶結(jié)合物，1．2．1研究方法對(duì)以上統(tǒng)計(jì)460份血液標(biāo)本展開(kāi)相關(guān)檢由于血清中IgG的含量相對(duì)較高，因此少量的特異吸附會(huì)引起測(cè)，采取雙抗原夾心法對(duì)丙型病毒肝炎抗體進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)，進(jìn)而對(duì)診斷結(jié)果和準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。PCR法對(duì)HCVRNA進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，可依據(jù)檢測(cè)結(jié)果對(duì)1．2．2檢測(cè)方法所需試劑包括：吉比愛(ài)、Ortho丙肝病毒HCV感染進(jìn)行早期診斷，然
5、而臨床實(shí)踐證實(shí)，該方法相對(duì)費(fèi)抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑，除此外還需要ChironRIBA確認(rèn)試劑。時(shí)、費(fèi)力，且試劑費(fèi)用也較為昂貴，臨床普及存在困難，特抗原制備：嵌合表位抗原經(jīng)包涵體的形式表達(dá)，利用離別是在基層醫(yī)院，因此對(duì)新型有效檢測(cè)方法進(jìn)行開(kāi)發(fā)具有很子交換層析方式展開(kāi)純化，而后經(jīng)SephadexG一50柱凝膠過(guò)大的必要性，對(duì)于HCV感染的診斷具有重要意義。濾收集，經(jīng)SDS—PAGE對(duì)抗原蛋白展開(kāi)鑒定?；魜y毒素B亞基融合蛋白表達(dá)系統(tǒng)通過(guò)可溶性可表達(dá)獲雙抗原夾心法：采取濃度為50mmol／L的碳酸鹽緩沖液得CTB2HCV融合蛋白抗原，適用于酶標(biāo)
6、記抗原的制備，然對(duì)抗原進(jìn)行稀釋，多肽抗原工作濃度為：結(jié)構(gòu)區(qū)多肽l51而由于CTB與大腸桿菌熱不穩(wěn)定性腸毒素B亞基(LTB)存在ml，NS4區(qū)多肽0．5l#ml，NS5區(qū)多肽0．25lg／ml，基因工程表較強(qiáng)的免疫交叉反應(yīng)，人血清中LTB抗體含量較高，可能對(duì)達(dá)抗原工作濃度c7為1gCml，C11為1g／ml。在每個(gè)孔中加基于融合蛋白的雙抗原夾心ELISA系統(tǒng)產(chǎn)生較為嚴(yán)重的非特入100，37~C條件下放置1h，而后在4"C冰箱中過(guò)夜保存，異性反應(yīng)，在大腸桿菌中表達(dá)了大腸桿菌噬體MS2DNA多聚經(jīng)濃度為30％的小牛血清PBST進(jìn)行封閉，每孔
7、加入200l，酶與HCV抗原決定簇的融合蛋白，將HRP標(biāo)記的CTB2HCV在37℃條件下放置1h，將封閉液棄去，取50山樣品稀釋液，融合蛋白決定簇的融合蛋白，對(duì)雙抗原夾心的ELISA系統(tǒng)進(jìn)每孔加5，37qc條件下放置30min，而后經(jīng)PBST沖洗5次。行建立。取最適合的酶稀釋度，經(jīng)棋盤(pán)滴定法每孔加入50工作濃近幾年雙抗原夾心法在丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)中逐漸被度的酶標(biāo)記抗原，37℃條件下放置15min，經(jīng)PBST沖洗5次，應(yīng)用，且取得了良好的效果，曾有學(xué)者對(duì)269份HCV抗體陽(yáng)每孔加入5O山底物緩沖液和50山顯色劑，37"C條件下放置性標(biāo)
8、本采取雙抗原夾心法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果僅3份未檢出，檢10rain，充分顯色。而后每孔加入5Om濃度為2mol／L的硫酸，測(cè)敏感性為98．84％_3J。本次研究中對(duì)138份HCV抗體陽(yáng)性終止反應(yīng)，采取酶標(biāo)儀在450Bill波長(zhǎng)
