資源描述：
《丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心法的應(yīng)用研究-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、·98·中國實用醫(yī)藥2014年4月第9卷第12期ChinaPracMed，Apr2014，Vo1．9，No．12丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心法的應(yīng)用研究時慧挺【摘要】目的對丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心法的I床應(yīng)用效果進(jìn)行分析探討，為今后的臨床工作提供可靠的參考依據(jù)。方法采集230份血液篩查結(jié)果為陰性標(biāo)本和230份質(zhì)控血液標(biāo)本，對其采取雙抗原夾心法展開丙型肝炎病毒抗體檢測，并對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果本組138份HCV抗體陽性標(biāo)本中經(jīng)雙抗原夾心法檢出136份，有2例未檢出，敏感性為98．55％。結(jié)論采取雙抗原夾心法對HCV抗體進(jìn)行檢測的結(jié)
2、果準(zhǔn)確可靠，敏感性較高，臨床優(yōu)勢顯著，值得關(guān)注并推廣?！娟P(guān)鍵詞】丙型肝炎病毒抗體；雙抗原夾心法；臨床應(yīng)用丙型肝炎病毒(HCV)為通過血液或者是血液制品進(jìn)行傳確認(rèn)試劑檢測證實這2份標(biāo)本均為陽性，雙抗原夾心法檢測播的一種病毒，在輸血過程中丙型肝炎病毒傳染為一個無法敏感性為98．55％。詳見表1。忽視的途徑，已經(jīng)受到了廣大醫(yī)學(xué)工作者和患者的重視。流表1雙抗原夾心法與ChironRIBA確認(rèn)試劑檢測結(jié)果比較行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示HCV感染的發(fā)生率較高，分布較廣，出于對輸血引起HCV傳播進(jìn)行控制的目的，臨床需對獻(xiàn)血者展開抗一HCV檢測J。本次研究中
3、出于對丙型肝炎病毒抗體雙抗原夾心法的臨床應(yīng)用效果進(jìn)行分析探討的目的，對2303討論份陰性血液標(biāo)本和230份質(zhì)控血液標(biāo)本展開了相關(guān)檢測，并流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示_2J，HCV感染表現(xiàn)出顯著的世對其檢測結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計分析，現(xiàn)匯報如下。界性分布，在我國HCV感染者約有4OOO萬，血液傳播為其1資料與方法主要傳播途徑，其中輸血為血液傳播的一種主要形式，因此1．1一般資料標(biāo)本來源于2012年1月～2013年12月間在對HCV感染血液傳播進(jìn)行有效控制的過程中，臨床需對本院血液篩查陰性標(biāo)本，抽取其中的230份作為研究對象，獻(xiàn)血者展開抗一HCV檢測。現(xiàn)
4、階段采取酶聯(lián)免疫吸附試驗對另收集230份質(zhì)控標(biāo)本。抗一HCV抗體進(jìn)行檢測為臨床診斷HCV感染的主要手段。在1．2方法實施抗一HCV酶聯(lián)免疫診斷時所需試劑均為二抗作酶結(jié)合物，1．2．1研究方法對以上統(tǒng)計460份血液標(biāo)本展開相關(guān)檢由于血清中IgG的含量相對較高，因此少量的特異吸附會引起測，采取雙抗原夾心法對丙型病毒肝炎抗體進(jìn)行檢測，并對假陽性結(jié)果的出現(xiàn)，進(jìn)而對診斷結(jié)果和準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響。檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析。PCR法對HCVRNA進(jìn)行檢測時，可依據(jù)檢測結(jié)果對1．2．2檢測方法所需試劑包括：吉比愛、Ortho丙肝病毒HCV感染進(jìn)行早期診斷，然
5、而臨床實踐證實，該方法相對費抗體酶聯(lián)免疫診斷試劑，除此外還需要ChironRIBA確認(rèn)試劑。時、費力，且試劑費用也較為昂貴，臨床普及存在困難，特抗原制備：嵌合表位抗原經(jīng)包涵體的形式表達(dá)，利用離別是在基層醫(yī)院，因此對新型有效檢測方法進(jìn)行開發(fā)具有很子交換層析方式展開純化，而后經(jīng)SephadexG一50柱凝膠過大的必要性，對于HCV感染的診斷具有重要意義。濾收集，經(jīng)SDS—PAGE對抗原蛋白展開鑒定?；魜y毒素B亞基融合蛋白表達(dá)系統(tǒng)通過可溶性可表達(dá)獲雙抗原夾心法：采取濃度為50mmol／L的碳酸鹽緩沖液得CTB2HCV融合蛋白抗原，適用于酶標(biāo)
6、記抗原的制備，然對抗原進(jìn)行稀釋，多肽抗原工作濃度為：結(jié)構(gòu)區(qū)多肽l51而由于CTB與大腸桿菌熱不穩(wěn)定性腸毒素B亞基(LTB)存在ml，NS4區(qū)多肽0．5l#ml，NS5區(qū)多肽0．25lg／ml，基因工程表較強(qiáng)的免疫交叉反應(yīng)，人血清中LTB抗體含量較高，可能對達(dá)抗原工作濃度c7為1gCml，C11為1g／ml。在每個孔中加基于融合蛋白的雙抗原夾心ELISA系統(tǒng)產(chǎn)生較為嚴(yán)重的非特入100，37~C條件下放置1h，而后在4"C冰箱中過夜保存，異性反應(yīng)，在大腸桿菌中表達(dá)了大腸桿菌噬體MS2DNA多聚經(jīng)濃度為30％的小牛血清PBST進(jìn)行封閉，每孔
7、加入200l，酶與HCV抗原決定簇的融合蛋白，將HRP標(biāo)記的CTB2HCV在37℃條件下放置1h，將封閉液棄去，取50山樣品稀釋液，融合蛋白決定簇的融合蛋白，對雙抗原夾心的ELISA系統(tǒng)進(jìn)每孔加5，37qc條件下放置30min，而后經(jīng)PBST沖洗5次。行建立。取最適合的酶稀釋度，經(jīng)棋盤滴定法每孔加入50工作濃近幾年雙抗原夾心法在丙型肝炎病毒抗體檢測中逐漸被度的酶標(biāo)記抗原，37℃條件下放置15min，經(jīng)PBST沖洗5次，應(yīng)用，且取得了良好的效果，曾有學(xué)者對269份HCV抗體陽每孔加入5O山底物緩沖液和50山顯色劑，37"C條件下放置性標(biāo)
8、本采取雙抗原夾心法進(jìn)行檢測，結(jié)果僅3份未檢出，檢10rain，充分顯色。而后每孔加入5Om濃度為2mol／L的硫酸，測敏感性為98．84％_3J。本次研究中對138份HCV抗體陽性終止反應(yīng)，采取酶標(biāo)儀在450Bill波長
