中耳膽脂瘤的相關研究課件

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1、中耳膽脂瘤上皮過度增殖行為與MDM2的相關性研究汪欣吉林大學第一醫(yī)院耳鼻咽喉-頭頸外科前言中耳膽脂瘤是耳鼻咽喉科的常見病，其主要的病理特征表現(xiàn)為中耳腔內(nèi)鱗狀上皮的高度增生和鄰近骨質(zhì)的破壞，以及程序性角質(zhì)細胞凋亡。它具有侵襲性、破壞性、遷移性、分化變異性、復發(fā)性等類似于惡性腫瘤的生物學特征，如不及時、盡早手術治療，可造成鄰近組織的破壞及感染，進而導致各種嚴重的并發(fā)癥甚至危及生命。進展中耳膽脂瘤組織酶學癌基因細胞因子細胞角蛋白DNA染色體生長因子及其受體疑難問題中耳膽脂瘤的發(fā)生是一個復雜的過程，具體的形成機制仍不清楚，因其具有類似于惡性腫瘤的生

2、物學特征，所以在成因及發(fā)生、發(fā)展的機制中與惡性腫瘤有很多類似的機制，但又有著根本的差別。膽脂瘤細胞增殖是受調(diào)控的，即上皮增殖增強的同時，凋亡也增強，腫瘤細胞的增殖是失控的。但有關膽脂瘤上皮細胞增殖和凋亡之間的關系以及膽脂瘤的骨破壞機制尚不十分清楚，有待于人們進一步探討研究。p53MDM2P53激活誘導MDM2MDM2P53P53激活復合物抑制MDM2下調(diào)p53減弱抑制抑制背景收集2000年6月至2003年12月間本院手術標本32例，經(jīng)臨床和病理檢查確診為后天繼發(fā)性膽脂瘤。其中男性18例，女性14例，年齡16-56歲，平均年齡32.5歲。同時

3、取正常外耳道皮膚12例做正常對照。臨床資料免疫組化方法采用SP法，步驟如下：1、切片常規(guī)脫蠟，充分水化；2、PBS沖洗3次，每次5min；3、3%過氧化氫甲醇溶液孵育，室溫10min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性；4、PBS沖洗3次，每次5min；5、0.1%胰蛋白酶37℃消化20min；6、PBS沖洗3次，每次5min；7、0.01M枸櫞酸鹽緩沖液PH6.0加熱92℃，抗原修復8、蒸餾水沖洗3次，每次5min，PBS浸泡5min；9、10%非免疫性山羊血清，室溫下10min；實驗方法10、吸去多余的血清，滴加適當稀釋的第一抗體，4℃過夜；

4、11、PBS沖洗3次，每次5min；12、滴加生物素標記的第二抗體，37℃孵育30min；13、PBS沖洗3次，每次5min；14、滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素，37℃孵育30min；15、PBS沖洗3次，每次5min；16、滴加新鮮配制的DAB，顯微鏡下觀察掌握染色情況；17、自來水沖洗，蘇木精復染核，中性樹膠封片。免疫組化染色過程中，用PBS代替一抗做陰性對照。實驗方法結(jié)果圖1MDM2在中耳膽脂瘤免疫組化染色MDM2陽性細胞為棕黃色，分布于膽脂瘤上皮全層細胞(SP×400)結(jié)果圖2MDM2在正常外耳道皮膚免疫組化染色正常外耳道皮膚

5、無MDM2陽性顆粒分布(SP×400)結(jié)果表1MDM2在中耳膽脂瘤上皮組織中表達（灰度值）①MDM2蛋白的高表達從膽脂瘤上皮的基底層向外逐漸增強，基底層表達最少，顆粒層和角質(zhì)層表達最強。②結(jié)合以往有關p53基因表達結(jié)果，我們推測MDM2在膽脂瘤組織中的高表達，可能是由于細胞中野生型p53基因激活誘導的。討論③但是在膽脂瘤組織中出現(xiàn)p53和MDM2在膽脂瘤的棘層、顆粒層共存的現(xiàn)象，表明MDM2沒有通過結(jié)合p53蛋白，使p53功能喪失。我們推測膽脂瘤上皮的過度增殖和凋亡可能存在p53/MDM2反饋環(huán)調(diào)節(jié)失常，主要是棘層和顆粒層細胞的調(diào)節(jié)失常。④

6、基底層細胞中MDM2的低表達，表明MDM2與p53結(jié)合形成的復合物減少，導致p53表達的增強，推測基底層細胞可能保持正常的p53/MDM2反饋調(diào)控，這可能是維持膽脂瘤基底層細胞正常生長的基礎之一。小結(jié)一、p53/MDM2反饋環(huán)異?？赡苁悄懼錾掀ぎ惓Ｔ鲋澈偷蛲龅脑蛑弧６?、在膽脂瘤基底層細胞表達少量的MDM2可能是維持膽脂瘤不同于惡性腫瘤組織的無限增殖和浸潤的基礎。Thanks！謝謝！