資源描述：
《實驗4 腸道致病菌分離鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在教育資源-天天文庫。
1、微生物學實驗四腸道致病菌分離鑒定微生物學教研室郭棵棵（綜合性實驗）錄像：球菌操作：1、化膿性球菌分離鑒定（二）（1）革蘭染色（2）轉種甘露醇或血清肉湯（3）血漿凝固酶實驗（4）觸酶實驗2、腸道菌分離鑒定（一）——糞便標本接種S.S平板材料：（1）載玻片1-2張/人（2）甘露醇或血清肉湯1支/人（3）新鮮兔血漿、生理鹽水各1支/6人（4）S.S平板1塊/人（5）糞便標本：傷寒、痢疾、副甲、副乙1套/教室實驗內容了解：腸道致病菌的血清學鑒定觸酶實驗、血漿凝固酶實驗的原理掌握：1.腸道致病菌分離鑒定的方法、步驟及生化反應2.化膿性球菌轉種甘露醇或血清肉湯的目的3.觸酶、血漿凝固酶實驗的結果
2、觀察[教學目標]觀察上次實驗結果、進行分析紫外線殺菌實驗抗生素敏感試驗抑菌圈直徑如果細菌對藥物敏感，則在藥片周圍有抑菌圈形成，敏感度越高抑菌圈直徑越大：>20mm：極度敏感5-20mm：中度敏感10-15mm：輕度敏感<10mm:不敏感無抑菌圈:耐藥化膿性球菌分離鑒定（二）膿汁血平板菌落葡萄狀排列鏈狀排列血漿凝固酶實驗甘露醇發(fā)酵實驗血清肉湯管接種三線法37℃24h革蘭染色觸酶實驗排列不典型2、操作革蘭染色及鏡檢觸酶實驗血漿凝固酶實驗轉種甘露醇或血清肉湯涂片：先在玻片上放一滴生理鹽水，然后刮取菌落在鹽水中乳化，涂成直徑約為1.0cm的膜。干燥：最好在室溫中自然干燥，也可在遠離火焰上方微
3、微烘干。但切勿靠火焰以免烤焦標本。固定：火焰固定。革蘭染色過程：初染：結晶紫1分鐘媒染：碘液1分鐘脫色：95%酒精半分鐘復染：稀釋復紅半分鐘鏡檢：球陽桿陰陽紫陰紅（1）革蘭染色葡萄球菌鏈球菌H2O2catalase2H2O+O2（2）觸酶實驗原理：產生過氧化氫酶的細菌，能催化過氧化氫生成水和分子氧出現(xiàn)氣泡。操作步驟：在潔凈玻片上滴一滴生理鹽水，用接種環(huán)取少許細菌培養(yǎng)物與生理鹽水中乳磨均勻，然后加3％過氧化氫數(shù)滴；或直接滴加3％過氧化氫于不含血液的細菌培養(yǎng)物中，立即觀察結果。結果觀察：有大量氣泡產生者為陽性。不產生氣泡者為陰性。G+球菌中，葡萄球菌和微球菌均產生過氧化氫酶，而鏈球菌屬為
4、陰性，故此試驗常用于G+球菌的初步分群（3）血漿凝固酶試驗1）原理致病性葡萄球菌能產生血漿凝固酶，在血漿中激活劑的作用下，可使血漿中的纖維蛋白原轉變?yōu)椴蝗苄缘睦w維蛋白，導致血漿凝固；而非致病性葡萄球菌由于不產生此酶，故不能凝固血漿，二者可據(jù)此予以區(qū)別。2）操作：玻片法取干凈玻片一塊血漿及生理鹽水各一滴，分別置于玻片兩端用接種環(huán)取細菌少許，分別與生理鹽水及血漿充分混勻結果觀察：30秒鐘內鹽水中的細菌呈均勻渾濁，而兔血漿則呈塊狀或顆粒狀者為陽性。（4）甘露醇試驗或血清肉湯接種1）甘露醇發(fā)酵試驗：接種甘露醇單糖管，觀察顏色改變及氣體產生情況。發(fā)酵甘露醇產酸者，使酸堿指示劑（溴麝香草酚蘭）在
5、酸性環(huán)境下由藍色轉變?yōu)辄S色。2）接種血清肉湯：觀察細菌生長狀態(tài)沉淀生長？混濁生長？部分沉淀，上清液混濁生長？腸道菌分離鑒定（一）腸道桿菌是一大群寄居在人類和動物的腸道中的生物學性狀近似的革蘭陰性的桿菌，該類細菌無芽胞，多數(shù)有周鞭毛。需氧或兼性厭氧，能分解葡萄糖及其他碳水化合物，產酸、有些產氣。多數(shù)腸道菌是腸道的正常菌群，當宿主免疫力降低或侵入腸道外等部位時，也可成為條件致病菌引起疾病。有的腸道桿菌例如傷寒沙門菌、志賀氏菌、致病性大腸桿菌等，是腸道致病菌，可導致人類某些腸道傳染病。腸道菌的種類繁多，為成功地檢出病原菌，通常選用選擇或鑒別培養(yǎng)基。除提供細菌生長所需營養(yǎng)物外，還含有抑菌劑和
6、指示劑?？捎羞x擇性抑制某些腸道細菌的生長，指示劑則能鑒別細菌的生化特性。本次試驗以糞便為標本進行腸道菌的分離鑒定。糞便標本中含有傷寒桿菌、副傷寒桿菌、痢疾桿菌以及大腸桿菌等腸道菌，要求從標本中分離出單一的致病菌，并通過后續(xù)的試驗鑒定出致病菌。S.S瓊脂培養(yǎng)基中含有膽鹽、煌綠和枸櫞酸鈉等成分，不僅能抑制G+菌的生長，也能抑制腸道非致病菌的生長。S.S瓊脂培養(yǎng)基大腸桿菌在此平板上生長，可分解培養(yǎng)基中乳糖產酸，與膽鹽作用形成膽酸沉淀，使中性紅指示劑變紅，形成紅色渾濁不透明菌落。腸道致病菌則不分解乳糖，形成無色或淡黃色菌落（因分解蛋白質產生堿性物質）。SS瓊脂培養(yǎng)基（Salmonella-S
7、higellaagar）大腸埃希菌沙門菌志賀菌操作：糞便S.S.平板挑選可疑菌落培養(yǎng)24h37℃接種三線法腸道菌分離鑒定（一）1、用無菌接種環(huán)挑取少量糞便標本，用劃線法接種于S.S平板上進行分離培養(yǎng)。2、放置于37oC孵箱內培養(yǎng)18-24小時，觀察平板上所生長的菌落，依據(jù)其形態(tài)大小，透明度和顏色等特點，初步識別致病菌和非致病菌。操作：化膿性感染采取哪些標本送檢有輔助診斷意義？為什么要用血漿凝固酶試驗鑒別致病性與非致病性葡萄球菌？思考題thanks
