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1、腸道致病菌的檢驗與鑒定第一節(jié)概述一、食品中常見的腸道致病菌沙門氏菌志賀氏菌大腸艾希氏菌變形桿菌耶爾森菌二、生物學(xué)特性1、形態(tài)與染色均為革蘭氏陰性桿菌,中等大小,無芽胞,多數(shù)具有周身鞭毛能運動,志賀氏菌屬無鞭毛無動力。2、培養(yǎng)和生化反應(yīng)(1)需氧或兼性厭氧,菌落中等大小,表面光滑,液體培養(yǎng)基混濁生長。(2)腸道致病菌一般不分解乳糖,而非致病菌多能分解乳糖、葡萄糖產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣。(3)可還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。三、抗原類型O抗原也稱菌體抗原,細胞壁脂肪糖,耐熱100℃不被破壞H抗原也稱鞭毛抗原,鞭毛蛋白,不耐熱,60℃30′可
2、破壞K抗原也稱表面抗原(莢膜抗原),多糖,具有阻抑O抗原發(fā)生凝集的現(xiàn)象,加熱60℃30′可消除抑阻作用菌毛抗原四、致病性(一)、致病物質(zhì)1、內(nèi)毒素:能引起機體發(fā)熱,白細胞減少,低血糖,血壓降低,嚴重者休克。2、外毒素:對小腸粘膜細胞具有特殊毒害作用,引起腹瀉。(二)、所致病疾1、傷寒和副傷寒2、食物中毒3、細菌性痢疾五、微生物檢驗的基本程序檢樣→處理→增菌培養(yǎng)→分離培養(yǎng)→生化試驗→血清學(xué)鑒定→報告第二節(jié)、沙門氏菌檢驗一、概況(一)沙門氏菌的命名根據(jù)所致疾病命名根據(jù)菌的發(fā)現(xiàn)地區(qū)命名以發(fā)現(xiàn)者的名字命名(二)沙門氏菌的抵抗力6
3、0℃30′可殺死(三)沙門氏菌的分類地位及定義1、地位:是腸桿菌科中的細菌2、定義腸桿菌科中形態(tài)和培養(yǎng)特征,生化反應(yīng)及抗原結(jié)構(gòu)相似,被O1噬菌體裂解的一群革蘭氏陰性桿菌。二、生物學(xué)特性(一)、形態(tài)與染色:革蘭氏染色陰性,無莢膜,無芽胞,多數(shù)有鞭毛,有動力,短小桿菌。(二)、培養(yǎng)特性1、需氧或兼性厭氧,最適溫度37℃,PH7.2~7.4。(沙門氏菌(紅色)侵入人體細胞2、對營養(yǎng)要求不高,在普通培養(yǎng)基生長良好,37℃,24h,能形成菌落中等大小,直徑2~3mm,圓形或卵形,表面光滑濕潤,無色半透明,邊緣整齊的菌落3、在液體培
4、養(yǎng)基中,呈均勻混濁性生長,無菌膜。(三)、生化特性1、發(fā)酵GLU,甘露醇,山梨醇產(chǎn)酸產(chǎn)氣(傷寒雞傷寒沙門氏菌少數(shù)不產(chǎn)氣)2、不發(fā)酵乳糖,蔗糖,側(cè)金盞花醇3、多數(shù)產(chǎn)生H2S(+),不產(chǎn)靛基質(zhì)(-),不分解尿素(-),不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇(V—P)(-),4、能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽(+)5、在KCN培養(yǎng)基中生長(-),苯丙氨酸脫氨酸(-)(四)、抗原結(jié)構(gòu)主要兩種:A、O抗原B、H抗原C、表面抗原(K抗原)D、菌毛抗原2、O抗原(1)O抗原的表示方法共有58種,用字母O和阿拉伯?dāng)?shù)字標記:O1、O2、O3、O4如:傷寒桿菌:O9、
5、O12(2)沙門氏菌的分群及表示方法用大寫字母及相關(guān)符號表示:A、B、C、D、E…、O51~O63、O65~O67(3)沙門氏菌中的主要菌群及其群特異性抗原A群----O2B群----O4C群----O6C1群----O7、C2群----O6O8、C3群----O8、C4群----O6O7O14D群----O9F群----O11E群----O3E2群----O3、O10族E3群----O3、O15E4群----O1、O3、O193、H抗原(鞭毛抗原)耐熱性差:60℃15′或酒精處理可破壞沙門氏H抗原有兩種:第1相:特異相
6、,用英文小寫字母表示a、b、c……zz1~z55第2相:非特異相,用阿拉伯?dāng)?shù)字表示1、2、3……其中也有用小寫字母a、n、x等表示。4、表面抗原:沙門氏菌有三種:Vi、M、K抗原Vi抗原位于菌體的最表層,包圍了O抗原,可阻礙O抗原的血清學(xué)凝集試驗。破壞Vi抗原:60℃30′,100℃5′含有Vi抗原的沙門氏菌:傷寒沙門氏菌、丙型副傷寒沙門氏菌、都柏林沙門氏菌三、沙門氏菌食物中毒(一)、引起食物中毒最常見的沙門氏菌:鼠傷寒沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌(二)、易引起沙門氏菌中毒的食品肉、蛋、乳類食品行業(yè)關(guān)注:美國兩
7、種花生醬含沙門氏菌(三)、中毒原因1、食用病畜禽的肉制品食品2、病畜禽、帶菌人和動物使食品受污染3、用不潔凈水處理食品(四)、臨床病狀(所致病菌)1、腸熱?。簜c副傷寒病,為慢性發(fā)熱的菌血病。由傷寒與副傷寒菌引起,潛伏期7~20天2、急性腸胃類:主要癥狀:頭痛、發(fā)熱、惡心、嘔吐、腹瀉、出冷汗、及全身不適,病程2~3天3、敗血病:高燒、寒戰(zhàn)、厭食、局部發(fā)炎、由豬霍亂沙門氏菌等引起四、微生物檢驗(一)、基本步驟(程序)檢樣→增菌(前增菌)→分離培養(yǎng)→生化試驗初步鑒定→血清學(xué)反應(yīng)最后鑒定→報告1、前增菌:用無選擇性的培養(yǎng)基使
8、處于瀕死狀態(tài)的細菌恢復(fù)活力;2、選擇性增菌:使沙門氏菌優(yōu)勢繁殖,其它細菌受到抑制;3、選擇性平板分離培養(yǎng):分離出所需的細菌;4、生化試驗:鑒定分離出來的細菌是否符合所檢項目的細菌;5、血清學(xué)鑒定:進一步鑒定。(二)、檢驗操作關(guān)鍵點1、前增菌:使待檢菌復(fù)壯前增菌:增菌液一般用BPW,36±℃,18~24h,長有雜菌。2