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1、梅毒螺旋體的檢測(cè)方法和應(yīng)用的探討馮凌思余健全陳航華張宇鐘劍文(佛山市高明區(qū)人民醫(yī)院廣東佛山528500)【中圖分類號(hào)】R759.1【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752(2016)17-0126-02梅毒是由蒼白密螺旋體主要通過(guò)性交或從母體通過(guò)胎盤輸入，侵犯多系統(tǒng)多器官的慢性傳染性疾病。隨著疾病的進(jìn)展，可以侵襲患者的心血管系統(tǒng)和祌經(jīng)系統(tǒng)等，對(duì)健康造成嚴(yán)重的損害。近年來(lái)梅毒的發(fā)病率成上升趨勢(shì)［1］，因此梅毒感染者的早期篩查和治療對(duì)控制疾病進(jìn)展和傳播至關(guān)重要，木文就梅毒螺旋體檢測(cè)方法的原理和應(yīng)用綜述如下。1.病原體的檢測(cè)1.1暗視野檢查法，一期梅毒硬
2、下疳、腫大淋巴結(jié)液二期梅毒病人皮膚黏膜損害處、扁平疣、梅毒疹；以上取材都含有梅毒螺旋體，在暗視野顯微鏡下進(jìn)行檢測(cè)，如發(fā)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)的蒼白螺旋體即可確診為梅毒。此方法特別適用于血清學(xué)陰性的早期梅毒診斷，特異性高，可做梅毒確證實(shí)驗(yàn)。1.2鍍銀染色法或直接熒光抗體試驗(yàn)(DFAT)檢查活體組織梅毒螺旋體。使用含硝酸銀的Fontana染液染色，觀察有無(wú)染成棕褐色梅毒螺旋體，其形態(tài)清晰易辯，且標(biāo)木可以永久保存，染色陽(yáng)性乂有典型皮損可確診，染色陰性不能完全排除梅毒，某些其他種類螺旋體可導(dǎo)致假陽(yáng)性，因此，銀染色陽(yáng)性結(jié)果的判斷應(yīng)慎重。特異性熒光抗體試驗(yàn)是用非致病性螺旋體培養(yǎng)物對(duì)
3、抗梅毒螺旋體抗血清或單克隆抗體吸收后，再與異硫鋱酸熒光素(FITC)相結(jié)合，在熒光顯微鏡下判讀結(jié)果，可區(qū)分梅毒螺旋體和非梅毒螺旋體，但對(duì)試劑要求較高，需熒光顯微鏡，特異性和靈敏性均高于暗視野檢查法，但可因取材、試劑以及操作等原因而導(dǎo)致假陰性。2.梅毒血清學(xué)檢查梅毒螺旋體感染人體約2?4周后，機(jī)體產(chǎn)生兩類抗體，一類為非特異性的抗類脂質(zhì)抗體，即反應(yīng)素抗體IgM和IgG抗體，另一類為特異性抗梅毒抗體IgM和IgG。非特異性的抗體在未經(jīng)治療的患者血清中可長(zhǎng)期存在，經(jīng)治療后可逐漸減少直至消失；特異性抗體在到二期梅毒時(shí)，血清中可出現(xiàn)全部抗梅毒螺旋體抗原的IgM和Ig
4、G抗體，該抗體經(jīng)治療后減少甚至消失，也可長(zhǎng)期甚至終生存在于人的血清中［2】。2.1非梅毒螺旋體抗體血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，即初篩實(shí)驗(yàn)，有VDRL、USR、RPR、TRUST四種檢測(cè)方法，其基本原理都是抗原（心磷脂、卵磷脂、腡固醇）和血清抗類脂抗原的抗體（反應(yīng)素）結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見(jiàn)，根據(jù)所形成的凝集塊大小、形態(tài)、分布特征來(lái)判斷其陽(yáng)性強(qiáng)度，陽(yáng)性可表示現(xiàn)癥感染患者、接受治療近期患者和生物學(xué)假陽(yáng)性者，可用作療效觀察、判斷愈后、復(fù)發(fā)或再感染指征。2.2梅毒螺旋體特異性抗體血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，主要方法冇梅毒螺旋體顆粒/血球凝集實(shí)驗(yàn)（TPPA/TPHA）、梅毒螺
5、旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（TP-ELISA）、熒光螺旋體抗體吸收實(shí)驗(yàn)（FTA-ABS）、化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CUA）和梅毒螺旋體蛋白印跡實(shí)驗(yàn)（WB）。TPPA/TPHA是致敏明膠/羊紅細(xì)胞顆粒與梅毒螺旋體抗體結(jié)合，形成凝集，根據(jù)其在U型孔中形成的顆粒孔的形狀和大小來(lái)判斷，以出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的最高稀釋度作為最終滴度，是0前公認(rèn)的梅毒確證試驗(yàn)［3】，確證試驗(yàn)陽(yáng)性可診斷梅毒感染，一種是現(xiàn)癥感染，另一種是治愈者，由于特異性梅毒螺旋體抗體可終身陽(yáng)性，因此不能用來(lái)作為療效觀察及治愈的判斷標(biāo)準(zhǔn)，而iLTPPA/TPHA法操作較復(fù)雜，試劑昂貴，結(jié)果判定需人工而不能用于自動(dòng)化，限
6、制了蘇大規(guī)模標(biāo)本的篩査［4】，主要用于篩檢陽(yáng)性標(biāo)本的確診。FTA-ABS為梅毒診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，特異性高，敏感性強(qiáng)，可用于各期梅毒的診斷，尤其適用于早期梅毒診斷，但需要好的熒光顯微鏡和操作技術(shù)才能獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。ELISA法是利用基因重組梅毒螺旋體的特異性抗原TP47和TP17包被微孔反應(yīng)板，采用雙抗原夾心法檢測(cè)梅毒螺旋體特異性抗體。此方法可應(yīng)用于自動(dòng)化檢測(cè)系統(tǒng)，可以進(jìn)行大批量的檢測(cè)，是目前篩査和檢測(cè)梅毒的一種良好方法。WB法是將免疫學(xué)的特異性和分子生物學(xué)的靈敏性相結(jié)合，具奮敏感性高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。將梅毒螺旋體Nichols株菌體細(xì)胞破碎，使用凝膠電泳
7、將梅毒螺旋體各種抗原成分轉(zhuǎn)印到膜條上作為固相。膜條于待測(cè)血清和酶標(biāo)抗體孵育,底物顯色后，當(dāng)血清中存在梅毒特異性抗體吋，則在印跡膜上相應(yīng)的特異性多肽原位置出現(xiàn)顯色帶?？煞謩e檢測(cè)IgM和IgG。機(jī)體體液免疫最早產(chǎn)生的抗梅毒特異性抗體是IgM,然后是IgG。IgM檢測(cè)可用于先天性梅毒的診斷、早期梅毒診斷、晚期梅毒診斷、活動(dòng)性神經(jīng)梅毒診斷以及梅毒螺旋體再次感染的診斷。CLIA化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體是?一種近年來(lái)用于測(cè)定梅毒特異性抗體的新方法，是放射免疫分析與酶聯(lián)免疫分析的結(jié)合，采用雙抗夾心法的原理,使用化學(xué)發(fā)光底物取代傳統(tǒng)的顯示底物，增加了檢測(cè)的靈敏度。C
8、LIA法的標(biāo)本檢測(cè)過(guò)程、結(jié)果判定過(guò)程均由儀器自動(dòng)完成，不僅操作簡(jiǎn)便，節(jié)約人力，節(jié)
