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1、談對中藥的抑菌作用的分析【】R9【】A【】1672－3783(2011)06－0348－01 【】由真菌引起的病害防治困難，只要有部分真菌細胞不被殺死，在適宜條件下就能生長繁殖，因此本抗菌實驗以真菌生長完全受到抑制來評價抑菌效果,即在較長時間(14d)仍能保持對真菌生長的抑制，才是理想的抗菌藥物。目的：篩選抗龍膽葉枯病菌活性的中藥。方法：以龍膽葉枯病菌（Alternariasp.）為供試菌種，對9種中藥乙醇提取物進行抗龍膽葉枯病菌活性實驗，采用有限稀釋法，測定最低抑菌濃度。結果：9種中藥乙醇提取物均有抑菌作用，其中蛇床子、川楝子提取物1
2、4d的最低抑菌濃度MIC100小于0.1g/ml。結論蛇床子、川楝子具有較強的抗龍膽葉枯病菌作用，可進一步開發(fā)為防治龍膽葉枯病藥物?！ 局黝}詞】中藥殺菌劑抑菌作用分析 龍膽葉枯?。ˋlternariasp.）是龍膽生產(chǎn)中的重要葉部病害，發(fā)生普遍。在龍膽及其它藥材生產(chǎn)中對病害的防治大量使用化學藥劑，導致環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留，影響藥材的質(zhì)量。我國中藥資源豐富，許多中藥含抑菌活性物質(zhì)，從中尋找抑制植物病原菌活性物質(zhì)，研制植物源新型殺菌劑，防治藥用植物病害，對生產(chǎn)符合GAP標準中藥材具有重要意義。 目前，國內(nèi)外學者在中草藥抗真菌實驗方面已
3、做了大量的工作，而從中篩選抗藥用植物病原真菌的研究較少。本研究根據(jù)以往中藥抗真菌文獻報道，選出9種中藥，研究其對龍膽葉枯病菌（Alternariasp.）的抑制作用?！ ∫徊牧吓c方法 1.材料：1）中藥：地膚子、苦參、知母、川楝子、蛇床子、大風子、蒼耳子、白鮮皮、土槿皮購于哈爾濱市同泰大藥房，經(jīng)鑒定為正品；95%乙醇（天津泰達化工有限公司），葡萄糖（沈陽市試劑三廠），瓊脂（青島水產(chǎn)品加工廠）?！ ?）供試菌種：龍膽葉枯病菌,從黑龍江北安栽培的粗糙龍膽GentianascabraBunge中分離純化得到，采用從病組織分離培養(yǎng)，將分離得到的
4、菌種接種到PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)，待產(chǎn)生孢子后，采用單孢分離的方法對菌種進行純化。應用柯赫氏證病法則（Kochˊspostulate）證明為龍膽葉枯病病菌，通過對分生孢子梗、分生孢子等的觀察鑒定為Alternariasp.?！ ?）培養(yǎng)基：用PDA培養(yǎng)基?！ ?方法 1）樣品的制備：將中藥樣品于60℃烘干，經(jīng)粉碎過20目篩，加5倍量的95%乙醇回流提取兩次，2h/次，濾過，濾液減壓濃縮至1g/ml（即每毫升含1g生藥）。濃縮液于冰箱（0～4℃）冷藏備用?！ ?）菌種活化：將保存的菌種接于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)4d備用?！ ?）抑菌實驗：在無菌操
5、作條件下，以1g/ml生藥的藥液為原液，用滅菌PDA培養(yǎng)基稀釋，分別稀釋為原液的50%，40%，30%，20%，10%，5%，1%，0.8%，0.6%，0.4%，0.2%，0.1%（相當于每毫升含0.5，0.4，0.3，0.2，0.1，0.05，0.01，0.008，0.006，0.004，0.002，0.001g生藥）12個濃度的藥基，對照為70%乙醇代替藥液配制，并控制藥基中的乙醇含量在15%以下（在配制高濃度的藥基前，對加入的藥液揮去部分乙醇），每管接種新培養(yǎng)的真菌菌落邊緣2mm2的真菌菌絲塊，重復3次，25℃培養(yǎng)。每天觀察接種菌落
6、生長情況，凡生長的菌落記為“”，凡完全不生長的菌落記為“-”?！ ?）MIC100的確定：MIC100為殺真菌劑(fungicide)的最低抑菌濃度，菌種接種在每種藥物系列梯度濃度培養(yǎng)基上，恒溫箱中培養(yǎng)7d和14d，用肉眼觀察，接種菌塊未擴大，無細胞生長，取完全不生長管最低藥物濃度為最低抑菌濃度(MIC)。 二結果 抗菌實驗結果：9種中藥乙醇提取物對龍膽葉枯病菌（Alternariasp.）的抑制作用（略）各中藥乙醇提取物的最低抑菌濃度，結果中藥乙醇提取物對龍膽葉枯病菌（略） 研究表明，9種中藥乙醇提取物對龍膽葉枯病病菌（Alter
7、nariasp.）均有不同程度的抑制作用，隨著培養(yǎng)時間的延長，抑菌作用逐漸減弱，培養(yǎng)7d最低抑菌濃度MIC100≤0.2g/ml有地膚子、蛇床子、白鮮皮、川楝子、大風子，最低抑菌濃度MIC100≤0.1g/ml有蛇床子、白鮮皮、川楝子；培養(yǎng)14d最低抑菌濃度≤0.2g/ml有川楝子、蛇床子、大風子，培養(yǎng)14d最低抑菌濃度MIC100為0.1g/ml有川楝子、蛇床子。將藥基上的菌種轉(zhuǎn)接到無藥PDA培養(yǎng)基上仍不能生長，表明真菌已被殺死，川楝子、蛇床子乙醇提取物有較強抗龍膽葉枯病菌（Alternariasp.）作用，其次為白鮮皮和大風子，可進一
8、步作田間實驗?！ ∪懻摗 ∮靡掖继崛】咕钚晕镔|(zhì)優(yōu)于水提法。本實驗采用乙醇回流提取法，有利于生物堿等生物活性物質(zhì)的提取，同時減少了提取液中蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì)?！ ”緦嶒灢捎迷谒幓辖臃N菌絲體
