人參中苯甲酸脅迫響應(yīng)基因wrky7的克隆與表達(dá)分析

《人參中苯甲酸脅迫響應(yīng)基因wrky7的克隆與表達(dá)分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、人參中苯甲酸脅迫響應(yīng)基因WRKY7的克隆與表達(dá)分析　　[摘要]WRKY轉(zhuǎn)錄因子是高等植物中最重要的轉(zhuǎn)錄因子基因家族之一，其在植物形態(tài)建成、生長發(fā)育以及應(yīng)對生物（病菌、害蟲等）、非生物（干旱、鹽、冷、熱等）脅迫過程中發(fā)揮重要作用。該研究根據(jù)人參化感自毒物質(zhì)苯甲酸誘導(dǎo)的人參轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)，設(shè)計(jì)全長擴(kuò)增引物，利用RTPCR方法獲得1條編碼WRKY轉(zhuǎn)錄因子的基因，暫命名為WRKY7，并對其進(jìn)行TA克隆、測序和序列分析。該基因cDNA全長1216bp，其開放閱讀框（openreadingframe，ORF）為1014bp，編碼337個(gè)氨基酸。序列分析及系統(tǒng)進(jìn)化

2、分析表明，該蛋白屬于WRKY家族第Ⅲ類成員，與西洋參種的WRKY6轉(zhuǎn)錄因子親緣關(guān)系最近，同源性為87%。實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析發(fā)現(xiàn)，苯甲酸脅迫后WRKY7的表達(dá)量顯著升高，推測該基因可能參與了人參響應(yīng)苯甲酸脅迫的過程，為進(jìn)一步研究人參自毒脅迫響應(yīng)的分子機(jī)制奠定了基礎(chǔ)?！　關(guān)鍵詞]人參；WRKY轉(zhuǎn)錄因子；化感自毒作用；克??；序列分析　　[Abstract]WRKYtranscriptionfactorisoneofthemostimportanttranscriptionfactorfamilieswidelyexistinginhigherpl

3、ants，whichplayingcriticalroleinplantmorphogenesis，development，biotic（includingphytopathogens，pestsetc.）andabiotic（drought，salt，chilling，hightemperature，etc.）stress.Inthepresentwork，primersusedtoamplifyfulllengthgeneencodingWRKYtranscriptionfactorweredesignedbasedonthetranscri

4、ptomedataofP.ginsengthatinducedbybenzoicacid，oneofthemostimportantautotoxinsidentifiedfromrootexudatesandrhizospheresoilofP.ginseng.Then，aWRKYgene，temporarilynamedasWRKY7，wasconfirmedbyRTRCR.Furthermore，sequencingandsequenceanalysisofWRKY7wasconducted.Resultsindicatedthat，the

5、fulllengthcDNAofWRKY7was1216bp，theopenreadingframe（ORF）ofwhichwas1014bp，encodes337aminoacids.Homologousanalysisandphylogenetictreeshowedthat，WRKY7belongedtotheⅢcategoryofWRKYfamilies，whichshowing87%similaritytoWRKY6inP.quinquefolius.RealtimePCRresultsshowedthattheexpressionof

6、WRKY7inP.ginsenginducedbybenzoicacidwasupregulatedmarkedlythanthecontrol，sowespeculatedthatWRKY7wasinvolvedintheresponsetobenzoicacidstress，whichwillbehelpfulforfurtherresearchonthemolecularmechanismofginsengplantresponsetobenzoicacidstress.　　[Keywords]Panaxginseng；WRKYtransc

7、riptionfactors；autotoxicity；cloning；bioinformaticanalysis　　?D錄因子是一類含有DNA結(jié)合域的蛋白質(zhì)，能識(shí)別基因上游特異的核苷酸序列，形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合體從而激活或抑制靶基因的表達(dá)，WRKY是植物十大轉(zhuǎn)錄因子家族之一。這類轉(zhuǎn)錄因子最早發(fā)現(xiàn)于甘薯[1]，后相繼從20余種植物中分離出WRKY轉(zhuǎn)錄因子[2]。WRKY蛋白的共同特點(diǎn)是含有60個(gè)氨基酸組成的WRKY結(jié)構(gòu)域，在N端有一段高度保守的WRKYGQK多肽序列，其是WRKY結(jié)構(gòu)域的核心，如果上述氨基酸發(fā)生變異，將直接影響WRKY轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合

8、活性[3]。根據(jù)WRKY轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)域的數(shù)量和鋅指結(jié)構(gòu)，可將WRKY轉(zhuǎn)錄因子分為3類[4]：第Ⅰ類含有2個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域，其鋅指結(jié)構(gòu)為C