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1、—學(xué)校代碼１０７０８：論文分類號(hào)：丨學(xué)號(hào)：１５０４００９＿？ａ＃ａａｉＳＨＡＡＮＸＩＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＳＣＩＥＮＣＥ＆ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ碩士學(xué)位論文Ｔ＇ｈｅｓｉｓｆｏｒＭａｓｔｅｒｓＤｅｇｒｅｅ發(fā)菜響應(yīng)鹽脅迫相關(guān)基因的ｆＳ—ｆＢｋｆ：：、■年５月＿論文答辯日期：ｉ／廣義：學(xué)位授予單位：陜西科技大學(xué)申請(qǐng)工學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目：發(fā)菜響應(yīng)鹽脅迫相關(guān)基因的克隆表達(dá)與功能鑒定學(xué)科門類：工學(xué)一級(jí)學(xué)科：食品科學(xué)與工程培養(yǎng)單位：食品與生物工程學(xué)院碩士生：蔡國(guó)強(qiáng)導(dǎo)師：陳雪峰教授2
2、018年5月CloningExpressionandFunctionalidentificationofsaltstress-relatedGenesfromNostocflagelliformeAThesisSubmittedtoShaanxiUniversityofScienceandTechnologyinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofEngineeringScienceByGuoQiangCaiSupervisor:Prof.XuefengChenMa
3、y2018發(fā)菜響應(yīng)鹽脅迫相關(guān)基因的克隆表達(dá)與功能鑒定摘要發(fā)菜是一種原核藍(lán)藻，生長(zhǎng)環(huán)境惡劣，具有很強(qiáng)的抗逆性。鹽脅迫下，發(fā)菜生長(zhǎng)受到抑制，多糖分泌量增加，通過(guò)高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序篩選出與鹽脅迫相關(guān)的差異表達(dá)基因，通過(guò)PCR擴(kuò)增、構(gòu)建質(zhì)粒，原核表達(dá)和功能研究，對(duì)這些基因進(jìn)行深入的研究和分析，為發(fā)菜響應(yīng)鹽脅迫分子方面的研究提供數(shù)據(jù)。本研究通過(guò)分子手段克隆得到五個(gè)基因片段，分別是：TrkH鉀吸收蛋白基因、TrkA-N鉀通道蛋白基因、TrkA-N1鉀通道蛋白基因、TrkA-N域蛋白基因以及DnaK分子蛋白基因。測(cè)序獲得序列，通過(guò)生物信息分析，結(jié)果如下：Tr
4、kH鉀吸收蛋白基因、TrkA-N鉀通道蛋白基因、TrkA-N1鉀通道蛋白基因、TrkA-N域蛋白基因及DnaK分子蛋白基因序列大小分別為1335bp、696bp、1692bp、678bp、1905bp，通過(guò)軟件分析發(fā)現(xiàn)：核酸序列具有保守性。蛋白分子量大小分別為48.30kDa、31.41kDa、61.48kDa、28.52kDa、69.85kDa，理論等電點(diǎn)分別為9.07、5.82、6.98、5.90、4.86。TrkH鉀吸收蛋白的跨膜區(qū)個(gè)數(shù)為10個(gè)，TrkA-N1鉀通道蛋白的跨膜區(qū)個(gè)數(shù)為2個(gè)，TrkA-N鉀通道蛋白、TrkA-N域蛋白以及D
5、naK分子蛋白都不含跨膜區(qū)。5個(gè)蛋白全部為親水性蛋白。TrkH鉀吸收蛋白氨基酸序列中有17個(gè)Ser位點(diǎn)、15個(gè)Thr位點(diǎn)、2個(gè)Tyr位點(diǎn)，TrkA-N鉀通道蛋白氨基酸序列中Ser、Thr以及Tyr的位點(diǎn)個(gè)數(shù)分別為：10個(gè)、6個(gè)和2個(gè)。TrkA-N1鉀通道蛋白氨基酸序列中Ser、Thr以及Tyr的位點(diǎn)個(gè)數(shù)分別為：19個(gè)、12個(gè)和6個(gè)。TrkA-N域蛋白氨基酸序列中有11個(gè)Ser位點(diǎn)、6個(gè)Thr位點(diǎn)、2個(gè)Tyr位點(diǎn)，DnaK分子蛋白氨基酸序列中有29個(gè)Ser位點(diǎn)、22個(gè)Thr位點(diǎn)、3個(gè)Tyr位點(diǎn)。DnaK保護(hù)分子蛋白、TrkA-N鉀通道蛋白、Tr
6、kA-N1鉀通道蛋白、TrkA-N域蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要為α螺旋和折疊，DnaK保護(hù)分子蛋白的主要為α螺旋、隨機(jī)卷曲以及折疊。TrkA-N鉀通道蛋白、TrkA-N域蛋白和DnaK保護(hù)分子蛋白均成功表達(dá)，條帶符合預(yù)期大小。表達(dá)條件為：當(dāng)菌液OD600達(dá)到0.8I時(shí)，加入IPTG誘導(dǎo)劑，繼續(xù)搖床培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：37℃，120rpm，誘導(dǎo)隔夜表達(dá)。TrkH鉀吸收蛋白、TrkA-N1鉀通道蛋白均未表達(dá)。研究為響應(yīng)鹽脅迫基因的構(gòu)建和蛋白組學(xué)研究打下基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：發(fā)菜，TrkH家族鉀吸收蛋白，TrkA-N鉀通道蛋白，TrkA-N域蛋白，DnaK保護(hù)分子蛋白
7、IICloningExpressionandFunctionalidentificationofsaltstress-relatedGenesfromNostocflagelliformeABSTRACTNostocflagelliformeisaterrestrialcyanobacteriawithstress-tolerance,whichlivesinpoorcondition.Itsgrowthissuppressedandtheproductionofpolysaccharideincreasedundersaltstress.I
8、thashighofficinalandediblevalue.Thedifferentialexpressedgenesrelatedtosaltstresswe
