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《發(fā)菜響應(yīng)鹽脅迫相關(guān)基因的克隆表達與功能鑒定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、—學(xué)校代碼１０７０８：論文分類號：丨學(xué)號：１５０４００９＿？ａ＃ａａｉＳＨＡＡＮＸＩＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＳＣＩＥＮＣＥ＆ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ碩士學(xué)位論文Ｔ＇ｈｅｓｉｓｆｏｒＭａｓｔｅｒｓＤｅｇｒｅｅ發(fā)菜響應(yīng)鹽脅迫相關(guān)基因的ｆＳ—ｆＢｋｆ：：、■年５月＿論文答辯日期：ｉ／廣義：學(xué)位授予單位：陜西科技大學(xué)申請工學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目：發(fā)菜響應(yīng)鹽脅迫相關(guān)基因的克隆表達與功能鑒定學(xué)科門類：工學(xué)一級學(xué)科：食品科學(xué)與工程培養(yǎng)單位：食品與生物工程學(xué)院碩士生：蔡國強導(dǎo)師：陳雪峰教授2
2、018年5月CloningExpressionandFunctionalidentificationofsaltstress-relatedGenesfromNostocflagelliformeAThesisSubmittedtoShaanxiUniversityofScienceandTechnologyinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofEngineeringScienceByGuoQiangCaiSupervisor:Prof.XuefengChenMa
3、y2018發(fā)菜響應(yīng)鹽脅迫相關(guān)基因的克隆表達與功能鑒定摘要發(fā)菜是一種原核藍藻，生長環(huán)境惡劣，具有很強的抗逆性。鹽脅迫下，發(fā)菜生長受到抑制，多糖分泌量增加，通過高通量轉(zhuǎn)錄組測序篩選出與鹽脅迫相關(guān)的差異表達基因，通過PCR擴增、構(gòu)建質(zhì)粒，原核表達和功能研究，對這些基因進行深入的研究和分析，為發(fā)菜響應(yīng)鹽脅迫分子方面的研究提供數(shù)據(jù)。本研究通過分子手段克隆得到五個基因片段，分別是：TrkH鉀吸收蛋白基因、TrkA-N鉀通道蛋白基因、TrkA-N1鉀通道蛋白基因、TrkA-N域蛋白基因以及DnaK分子蛋白基因。測序獲得序列，通過生物信息分析，結(jié)果如下：Tr
4、kH鉀吸收蛋白基因、TrkA-N鉀通道蛋白基因、TrkA-N1鉀通道蛋白基因、TrkA-N域蛋白基因及DnaK分子蛋白基因序列大小分別為1335bp、696bp、1692bp、678bp、1905bp，通過軟件分析發(fā)現(xiàn)：核酸序列具有保守性。蛋白分子量大小分別為48.30kDa、31.41kDa、61.48kDa、28.52kDa、69.85kDa，理論等電點分別為9.07、5.82、6.98、5.90、4.86。TrkH鉀吸收蛋白的跨膜區(qū)個數(shù)為10個，TrkA-N1鉀通道蛋白的跨膜區(qū)個數(shù)為2個，TrkA-N鉀通道蛋白、TrkA-N域蛋白以及D
5、naK分子蛋白都不含跨膜區(qū)。5個蛋白全部為親水性蛋白。TrkH鉀吸收蛋白氨基酸序列中有17個Ser位點、15個Thr位點、2個Tyr位點，TrkA-N鉀通道蛋白氨基酸序列中Ser、Thr以及Tyr的位點個數(shù)分別為：10個、6個和2個。TrkA-N1鉀通道蛋白氨基酸序列中Ser、Thr以及Tyr的位點個數(shù)分別為：19個、12個和6個。TrkA-N域蛋白氨基酸序列中有11個Ser位點、6個Thr位點、2個Tyr位點，DnaK分子蛋白氨基酸序列中有29個Ser位點、22個Thr位點、3個Tyr位點。DnaK保護分子蛋白、TrkA-N鉀通道蛋白、Tr
6、kA-N1鉀通道蛋白、TrkA-N域蛋白的二級結(jié)構(gòu)主要為α螺旋和折疊，DnaK保護分子蛋白的主要為α螺旋、隨機卷曲以及折疊。TrkA-N鉀通道蛋白、TrkA-N域蛋白和DnaK保護分子蛋白均成功表達，條帶符合預(yù)期大小。表達條件為：當(dāng)菌液OD600達到0.8I時，加入IPTG誘導(dǎo)劑，繼續(xù)搖床培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：37℃，120rpm，誘導(dǎo)隔夜表達。TrkH鉀吸收蛋白、TrkA-N1鉀通道蛋白均未表達。研究為響應(yīng)鹽脅迫基因的構(gòu)建和蛋白組學(xué)研究打下基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：發(fā)菜，TrkH家族鉀吸收蛋白，TrkA-N鉀通道蛋白，TrkA-N域蛋白，DnaK保護分子蛋白
7、IICloningExpressionandFunctionalidentificationofsaltstress-relatedGenesfromNostocflagelliformeABSTRACTNostocflagelliformeisaterrestrialcyanobacteriawithstress-tolerance,whichlivesinpoorcondition.Itsgrowthissuppressedandtheproductionofpolysaccharideincreasedundersaltstress.I
8、thashighofficinalandediblevalue.Thedifferentialexpressedgenesrelatedtosaltstresswe
