腫瘤靶向治療,基因檢測(cè)

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1、腫瘤治療相關(guān)基因檢測(cè)2.腫瘤個(gè)體化治療發(fā)展趨勢(shì)1.腫瘤個(gè)體化治療循環(huán)腫瘤細(xì)胞腫瘤分子診斷臨床上治療腫瘤的方法患者對(duì)藥物是否敏感？毒性是否可耐受？患者治療后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)有多高？個(gè)體化治療：醫(yī)學(xué)概念。應(yīng)用它不僅降低并發(fā)癥的發(fā)生,還降低醫(yī)療費(fèi)用。腫瘤標(biāo)準(zhǔn)化治療Ⅰ期患者：手術(shù)/化療Ⅲ、Ⅳ期患者：放/化療+手術(shù)局部晚期患者：手術(shù)、化療、放療、靶向腫瘤個(gè)體化治療標(biāo)本→基因檢測(cè)→遺傳特性→選擇化療/靶向藥物病理分型分子分型已發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)至少9種EML4-ALK融合基因的突變體：v1、v2、v3a、v3b、v4、v5a、v5b、v6、v7檢測(cè)方法：RT-PCR,FISH,PCR-測(cè)序等EML4和

2、ALK兩個(gè)基因分別位于人類2號(hào)染色體的p21和p23帶克唑替尼的靶標(biāo)——EML4-ALK融合基因靶向EGFR的抗腫瘤藥物類別一：小分子酪氨酸激酶抑制劑（EGFR－TKI)作用機(jī)制：抑制EGFR胞內(nèi)區(qū)酪氨酸激酶活性，阻斷EGFR信號(hào)通路；藥物代表：吉非替尼（阿斯利康）；厄羅替尼（羅氏）。類別二：?jiǎn)慰寺】贵w(mAb)作用機(jī)制：與EGFR胞外區(qū)結(jié)合，阻斷配體與EGFR的結(jié)合；藥物代表：西妥昔（默克）；貝伐單抗（羅氏）?；駿GFR熱點(diǎn)突變位點(diǎn)EGFR主要突變?cè)冢和怙@子18，19，20，21耐藥突變：T790M靶向藥物西妥昔單抗靶標(biāo)——K-ras基因檢測(cè)NCCN明確指出西妥昔單抗（愛必

3、妥）用藥之前須檢測(cè)K-ras基因突變檢測(cè)；K-ras突變型患者并不能從抗EGFR治療（愛必妥）中獲益,反而徒增不良反應(yīng)危險(xiǎn)和治療費(fèi)用；中國人群中K-ras基因突變率15%！15%的病人不應(yīng)該使用愛必妥！野生型突變型WorldJGastroenterol.2011November21;17(43):4779-4786.基因KRAS熱點(diǎn)突變位點(diǎn)10KRAS主要突變?cè)冢和怙@子2（密碼子12，13），3（密碼子61）個(gè)體化檢測(cè)平臺(tái)基因突變檢測(cè)——ARMS技術(shù)，測(cè)序等ARMS技術(shù)——普通PCR等位基因特異性擴(kuò)增法（AlleleSpecificAmplification，ASA）建立于19

4、89年，是PCR技術(shù)應(yīng)用的發(fā)展，也稱擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)（AmplificationRefractoryMutationSystem?，?ARMS）、等位基因特異性PCR（AlleleSpecificPCR，?ASPCR）等。方法：2條正向引物（針對(duì)正常DNA，突變DNA）1條反向引物2個(gè)平行的PCR反應(yīng)普通PCR儀應(yīng)用：對(duì)微量突變進(jìn)行檢測(cè)。TaqMan-ARMS技術(shù)TaqMan-ARMS探針技術(shù)基于實(shí)時(shí)PCR平臺(tái)，結(jié)合了ARMS突變富集和Taqman-MGB特異性熒光檢測(cè)兩種技術(shù)。Taqman-MGB：針對(duì)SNP位點(diǎn)特異性擴(kuò)增的探針，可區(qū)分一個(gè)堿基的突變。一個(gè)PCR體系中：1對(duì)引

5、物，1條探針每個(gè)位點(diǎn)需要做至少兩管PCR擴(kuò)增?。。NP位點(diǎn)檢測(cè)應(yīng)用檢測(cè)方法/檢測(cè)靈敏度100%50%5%1%0.01%耗時(shí)費(fèi)用直接測(cè)序法+++++--->6h低Taqman-ARMS?++++++++++++-1.5h中等焦磷酸測(cè)序法++++++-->6h中等TaqmanQPCR技術(shù)+++++++/---<2h中等EGFR基因突變檢測(cè)方法靈敏度的比較測(cè)序技術(shù)發(fā)展歷程SangerSequencing（1977）IonSemiconductorSequencing（2011）Next-GenSequencing（2005以后）IonTorrent半導(dǎo)體測(cè)序原理IonTorrent

6、半導(dǎo)體測(cè)序平臺(tái)及芯片PI芯片：sequenceexomesandwholetranscriptomes（5Gb）腫瘤類型靶向藥物基因樣本療效佳的情況非小細(xì)胞肺癌易瑞沙（Iressa）特羅凱（Tarceva）EGFRKRAS手術(shù)/穿刺/胸腹水/血漿EGFR突變/KRAS野生克唑替尼EML4-ALK融合手術(shù)/穿刺/胸腹水陽性胃腸間質(zhì)瘤格列衛(wèi)（Gleevec）C-KitPDGFRA手術(shù)/穿刺/內(nèi)鏡活檢/血漿C-kit第11外顯子突變/PDGFR突變慢性粒細(xì)胞白血病格列衛(wèi)（Gleevec）達(dá)沙替尼(Dasatinib)尼羅替尼(Nilotinib)ABL骨髓/全血無T315I突變?nèi)橄侔?/p>

7、拉帕替尼（Lapatinib）PI3K手術(shù)/穿刺/內(nèi)鏡活檢/血漿野生型赫塞汀Her-2病理切片高表達(dá)/表達(dá)陽性目前成熟的腫瘤分子靶向藥物敏感性基因檢測(cè)基因表達(dá)量（mRNA）檢測(cè)——指導(dǎo)個(gè)體化化療可使標(biāo)準(zhǔn)化療方案得到個(gè)體化應(yīng)用mRNA檢測(cè)主要技術(shù)特色采用熒光定量PCR技術(shù)，采用內(nèi)參比RNA作為質(zhì)控對(duì)照，應(yīng)用beta-actin作為內(nèi)對(duì)照，定量檢測(cè)檢測(cè)目的基因mRNA表達(dá)水平。適用于各種腫瘤組織檢測(cè)，包括石蠟標(biāo)本、穿刺標(biāo)本、冰凍活檢標(biāo)本等。國內(nèi)采用校準(zhǔn)RNA（CalibratorRNA）方法進(jìn)行