kai1在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義

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1、Kai1在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義【】目的：探討Kai1在皮膚鱗狀細(xì)胞癌(SCC)中的表達(dá)及意義。方法：采用免疫組織化學(xué)S-P法和核酸分子原位雜交技術(shù)分別檢測(cè)10例正常皮膚、30例皮膚SCC中Kai1、Kai1mRNA的表達(dá)；利用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)采集、分析圖像，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果：Kai1、Kai1mRNA在正常皮膚中均呈強(qiáng)陽(yáng)性或陽(yáng)性表達(dá)，在SCC中均呈弱陽(yáng)性或陰性表達(dá)。兩者在SCC中的表達(dá)均明顯低于正常皮膚，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論：Kai1蛋白及其mRNA的低表達(dá)可能在皮膚SCC發(fā)生、發(fā)展

2、的過(guò)程中發(fā)揮重要作用?！　　娟P(guān)鍵詞】Kai1；Kai1mRNA；鱗狀細(xì)胞癌　　　　Kail基因是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，主要存在于細(xì)胞和其他組織表面，屬于跨膜4超家族成員，具有介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，牽涉到細(xì)胞融合作用、黏附、遷徙到凋亡、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變的生物學(xué)過(guò)程，其下調(diào)與許多腫瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。我們采用免疫組織化學(xué)、原位雜交技術(shù)分別檢測(cè)Kai1蛋白及其mRNA在皮膚SCC和正常皮膚組織中的表達(dá)，探討Kai1與皮膚SCC發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系?！　?材料與方法　　1.1實(shí)驗(yàn)標(biāo)本標(biāo)本于2006年1月至

3、20010年12月遵義醫(yī)學(xué)院第五附屬（珠海）醫(yī)院和中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院病理科的存檔病例，均經(jīng)HE染色，光鏡觀察、確診。SCC30例（高分化25例，中分化4例，低分化1例），其中男24例，女6例；部位：頭皮2例，面部14例，下肢7例，陰莖7例;年齡36～84歲，平均63．03歲。患者術(shù)前均未行放射治療和化學(xué)治療。正常皮膚組織10例，取自臨床手術(shù)切除的帶有正常皮膚組織的病變標(biāo)本。所有蠟塊以4μm厚度連續(xù)進(jìn)行切片?！　?.2主要試劑兔抗人Kai1多克隆抗體、Kai1mRNA寡核苷酸探針原位雜交試劑盒，均購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公

4、司。S-P免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司?！　?.3實(shí)驗(yàn)方法　　1.3.1免疫組化染色（S-P法）以前列腺組織為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，Kai1根據(jù)產(chǎn)品要求和預(yù)試結(jié)果確定為1:100，用專用抗體稀釋液稀釋。切片常規(guī)脫蠟至水，微波抗原修復(fù)，操作步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，經(jīng)DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明，中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察，拍照。　　1.3.2原位雜交(ISH)以滴加不含探針的預(yù)雜交液作為陰性對(duì)照，以前列腺組織為陽(yáng)性對(duì)照，切片經(jīng)65℃烘烤過(guò)夜，操作步驟按原位雜交試劑盒說(shuō)明

5、書(shū)進(jìn)行，每張切片滴加20μl含Kai1mRNA寡核苷酸探針的雜交液，40℃雜交過(guò)夜，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水干燥、透明，中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察，拍照?！　?.4免疫標(biāo)記結(jié)果判斷Kai1蛋白和Kai1mRNA以細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。陽(yáng)性等級(jí)判定采用半定量積分法，包括綜合染色程度和陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)兩個(gè)方面，根據(jù)每張切片的陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及著色深淺計(jì)分:在400倍視野下，每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)不同的視野，每視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，分別記錄每個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量并計(jì)算其算術(shù)平均值：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%為0分，6%~25%

6、為1分，26%~50%為2分，51%~75%為3分，＞75%為4分;陽(yáng)性強(qiáng)度:無(wú)著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。然后根據(jù)二者記分相加判斷陽(yáng)性等級(jí)：0~1分為陰性，2~3分為弱陽(yáng)性，4~5分為陽(yáng)性，6~7分為強(qiáng)陽(yáng)性。應(yīng)用顯微圖像分析系統(tǒng)分別檢測(cè)陽(yáng)性染色的表達(dá)水平(陽(yáng)性面積)及其表達(dá)強(qiáng)度(光密度)。　　1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法運(yùn)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包，數(shù)據(jù)均以表示，對(duì)結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)和相關(guān)分析，以P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?！　?結(jié)果　　2.1Kai1蛋白和Kai1mRNA的表達(dá)Kai1蛋白和Kai1mRNA在正

7、常皮膚表皮組織中的表達(dá)均呈強(qiáng)陽(yáng)性或陽(yáng)性；在SCC組織中的表達(dá)分布：在高分化SCC的角化珠中呈陽(yáng)性，而在其周邊的癌細(xì)胞以及中分化SCC及低分化SCC中均呈弱陽(yáng)性或陰性表達(dá)（結(jié)果如圖1-4）。Kai1蛋白和Kai1mRNA在皮膚SCC中的表達(dá)水平和表達(dá)強(qiáng)度均明顯低于正常皮膚組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（結(jié)果如表1）?！　”?Kai1在鱗狀細(xì)胞癌與正常皮膚中的表達(dá)　　注：S代表陽(yáng)性面積代數(shù)和/分析區(qū)域面積的平均值　　G代表光密度　　P<0.01　　　　2.2Kai1蛋白和Kai1mRNA表達(dá)的相關(guān)性經(jīng)過(guò)相關(guān)性分析,Kai1蛋白與Kai1

8、mRNA在皮膚SCC中的表達(dá)成正相關(guān)(R=0.751，P<0.05)?！　?討論　　皮膚鱗狀細(xì)胞癌(squamouscellcarcinoma，SCC)是源于上皮組織角質(zhì)形成細(xì)胞的惡性腫瘤，在我國(guó)的發(fā)病率居皮膚惡性腫瘤之首，占皮膚科惡性腫瘤的78.5％～90.9％[1]，并呈上升趨勢(shì)，其發(fā)