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1、抗凋亡基因Mcl-1在人肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及臨床意義廖明媚王寧鄧星明潘一峰趙勁風(fēng)(通訊作者)(中南大學(xué)湘雅醫(yī)院肝膽腸外科研究中心410008)【摘要】目的研究抗凋亡基因Mcl-1在人肝細(xì)胞癌、癌旁及正常肝組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)51例人肝細(xì)胞癌組織、49例癌旁組織和25例正常肝組織中髓樣細(xì)胞白血病-1(Mcl-1)基因的表達(dá)情況,并加以分析。結(jié)果Mcl-1在肝細(xì)胞癌組織中陽(yáng)性率為68.63%,與正常肝組織(8.00%)相比，差異有顯著性(p<0.01)；Mcl-1表達(dá)強(qiáng)度與性別、年齡、HBV感染、腫瘤
2、大小、病理分級(jí)和組織分化無(wú)相關(guān)性(p〉0.05)。結(jié)論抗凋亡基因Mcl-1在肝細(xì)胞癌組織中過(guò)表達(dá)，其異常表達(dá)與肝癌的發(fā)生有關(guān)，是肝癌治療的一個(gè)新的細(xì)胞因子靶點(diǎn).【關(guān)鍵詞】Mcl-1肝細(xì)胞癌基因表達(dá)免疫組織化學(xué)【中圖分類(lèi)號(hào)】R73-3【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752(2012)16-0044-02髓樣細(xì)胞白血病-l(MyeloidCellLeukelia-1,Mcl-1)基因是Bcl-2基因家族中的一員，也是肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)中目前已知的重要抗凋亡因子，該基因廣泛表達(dá)于人類(lèi)正
3、常組織中，上皮組織、淋巴組織的生發(fā)中心細(xì)胞、神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞等均有Mcl-1基因的表達(dá)，同樣，Mcl-1基因在人類(lèi)腫瘤組織及腫瘤細(xì)胞系中也有表達(dá)，且Mcl-1基因定位的人1號(hào)染色體長(zhǎng)臂在腫瘤性疾病及其癌前病變中有重疊或重排現(xiàn)象，因此研究Mcl-1基因在不同腫瘤組織及細(xì)胞系中的異常表達(dá)對(duì)了解腫瘤發(fā)生的可能機(jī)制及抗腫瘤治療的可能途徑有重要意義，是未來(lái)新的抗癌治療策略中一個(gè)新的靶點(diǎn)［1-2］,也是在臨床疾病中一個(gè)有效的預(yù)后預(yù)測(cè)指標(biāo)［3］。1材料和方法1.1病例與標(biāo)木按照國(guó)家肝癌防治協(xié)作組制定的肝細(xì)胞癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，收集中南大學(xué)湘雅醫(yī)院2007年3
4、月至2008年9月病例資料完整的原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者51例手術(shù)切除的組織，其中男性47例，女性4例，患者年齡為21-69歲，平均年齡49±12歲，其中＜40歲10例(19.61%)，40?60歲30例(58.82%),〉60歲11例(21.57%)。肝細(xì)胞癌病例中合并乙型肝炎者36例(70.59%),合并慢性膽囊炎者27例(52.94%),合并肝硬化者19例(37.25%),巨大肝癌5例(9.80%)o所用組織經(jīng)甲醛固定，常規(guī)組織處理，石蠟包埋，切成3μm厚切片，51例病例中含癌組織51例、癌旁組織49例和正常肝組織
5、25例，所冇切片均做HE染色，肝癌組織學(xué)病理分級(jí)采用Edmondson-Steiner四級(jí)分級(jí)法。1.2試劑兔抗人Mcl-1單克隆抗體購(gòu)自SANTACRUZ公司；免疫組化試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司，操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行；蘇木素購(gòu)自北京中杉公司；DAB顯色試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司；其它試劑如二甲苯、乙醇等化學(xué)試劑購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)；顯微鏡購(gòu)自L(fǎng)esia。1.3免疫組化SP法SP(streptavidin-perosidase)法即鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)'法.步驟如下：烤片→常規(guī)脫蠟→梯度脫水&nr
6、r;內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑孵育→正常羊血清工作液封閉→Mcl-l—抗(1:200)4°C冰箱孵育過(guò)夜(用PBS緩沖液代替?一抗作陰性對(duì)照)→生物素標(biāo)記二抗孵育→鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化酶孵育→避光DAB液染色→蘇木素復(fù)染→l%鹽酸酒精分化→自來(lái)水返蘭→常規(guī)脫水干燥→二甲苯透明→中性樹(shù)膠封片&nrr;顯微鏡下閱片并總結(jié)染色結(jié)果。1.4切片結(jié)果評(píng)價(jià)免疫組化陽(yáng)性反應(yīng)為細(xì)胞質(zhì)染色呈黃色或棕黃色。結(jié)果采用雙人雙盲顯微鏡觀(guān)察，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)采
7、用綜合評(píng)價(jià)法，首先染色強(qiáng)度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黑黃色為3分；另外，每張切片的癌、癌旁和正常組織各隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)視野500個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞所占比例進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：＜10%為0分，10?40%為1分，41?70%為2分，＞70%為3分.兩者得分乘積為基因的表達(dá)水平，0?1.0分為（一），1.1?3.0分為（+），3.1?6.0分為（++）,〉6.0分為（+++）。由于Mcl-1在正常肝組織中染色陰性或弱陽(yáng)性，因此定義（一?+）為陰性表達(dá)，（++?+++）為陽(yáng)性表達(dá)。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13
8、.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。率的比較采用X2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)，p＜0.05為差異存統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1病例分析結(jié)果根據(jù)Edmondson標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)結(jié)果為I級(jí)1例（1.96%），II級(jí)27例（52.94%），III級(jí)
