大鼠實驗性牙移動過程牙周組織中ⅰ型膠原的表達變化.doc

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1、大鼠實驗性牙移動過程牙周組織中I型膠原的表達變化編輯?！菊俊灸康摹垦芯空ψ饔孟麓笫笱乐苣ぶ蠭型膠原的表達變化，探討正畸牙移動過程中牙周組織的改建機理。【方法】利用SD雄性大鼠建立實驗性牙移動模型，采用免疫組織化學染色技術分別觀察了大鼠牙周膜中I型膠原在機械力刺激下的免疫陽性表達變化及相互關系?！窘Y果】大鼠牙齒加力后，實驗組與對照組牽張區(qū)之間的染色統(tǒng)計學上具有顯著性差異，兩實驗組壓縮區(qū)與牽張區(qū)染色強度差異有統(tǒng)計學意義，牽張區(qū)染色強度明顯高于壓縮區(qū)。牽張區(qū)1?3d開始強表迗，一直持續(xù)到14d;壓縮區(qū)Id后開始表達減弱，7d后開

2、始回升。另外發(fā)現(xiàn)相當于50?15Og質量的正畸力對大鼠牙周組織無明顯破壞?！窘Y論】機械力作用下，大鼠牙周膜I型膠原代謝發(fā)生變化：牽張區(qū)表達增強，壓縮區(qū)表達減弱，且與時間密切相關。相當于50?150g質量的機械力范圍是正畸用力的安全范【關鍵詞】正畸牙移動；I型膠原；免疫組織化學1材料和方法動物模型的建立選取g的8周齡健康雄性SD大鼠共56只，隨機分為七個時間組，每組8只，根據臨床常用的正畸力值將各組進一步分成輕加力組、重加力組每小組4只。采用鹽酸氯胺酮肌注麻醉。將大鼠一側上頜第一磨牙和前牙間用結扎絲拴正畸用Ni-Ti螺旋彈，測力計測

3、力，建立不同大小正畸力作用下的牙移動模型。對側未做處理的磨牙作為對照。分別于加力后3、6、12、24h和3、7、14d定期處死。標本的制備固定與脫鈣：按相應時間段將大鼠肌注麻醉，40g/L多聚甲醛左心室灌注處死。解剖上頜骨，保留上領第一磨牙及周圍組織，多聚甲醛溶液固定12ho19g/LEDTA脫鈣液中脫鈣30do洗凈脫鈣液，梯度酒精脫水，石蠟包埋。組織切片厚度控制在5nm，裱于玻片上。免疫組織化學染色大鼠的上頜骨冰凍切片，常規(guī)LSAB法。主要試劑：第一抗體：兔抗大鼠I型膠原多克隆抗體Boster公司(Difco88-03-28);

4、DAB顯色液(Sigma公司5627)。陰性對照試驗：①空白對照，用mol/LPBS(pH)取代一抗;②血清對照，用正常羊血清取代一抗。統(tǒng)計學處理為保證實驗結果的可比性，不同組采集的樣本均保存至同一時間，由同一實驗員在相近時間段和相同條件下進行免疫組化染色。采用Image-ProPlus圖像分析軟件對各組牙周膜染色強度進行測量，分析操作由同一實驗員在同一時間內采用統(tǒng)一標尺測得，測量次數為3次。在牽張區(qū)和壓縮區(qū)牙周膜根中下1/2區(qū)隨機選擇三個視野，測量其積分光密度值，采用統(tǒng)計軟件，將結果進行t檢驗和雙因素方差分析，并采用LSD法進行

5、驗后多重比較。2結果在未加力正常對照組，I型膠原呈束狀排列，整齊一致、無斷裂，染色均勻，主要在細胞間質著色。實驗組壓縮區(qū)，I型膠原纖維排列紊亂，染色不均，3d后壓縮側可見明顯的骨吸收陷窩和多核破骨細胞。實驗組牽張區(qū)，I型膠原束明顯增寬，膠原纖維排列整齊。實驗組與對照組牽張區(qū)之間的染色統(tǒng)計學上具有顯著性差異，但實驗組壓縮區(qū)與對照組壓縮區(qū)之間，兩對照組壓縮區(qū)與牽張區(qū)之間染色強度統(tǒng)計學上無顯著性差異。兩實驗組壓縮區(qū)與牽張區(qū)染色強度統(tǒng)計學上有顯著性差異，牽張區(qū)染色強度明顯高于壓縮區(qū)，并與時間有關：在牽張區(qū)實驗組加力后3、6h的I型膠原染色

6、強度與對照組比較無明顯差異；12h、Id開始染色陽性反應信號逐漸增強，第3天達到高峰，第7天、14天的染色陽性信號強度仍高于對照組，但開始逐漸下降。而在壓縮區(qū)實驗組加力第1天的I型膠原染色強度開始降低，到第7天，染色強度開始逐漸回升。編輯。3討論牙移動過程中，牙周膜韌帶是最先受力發(fā)生改變的組織，牙周膜的動態(tài)改建是牙周膜受正畸作用力產生反應的結果，而牙周膜結構的完整性是牙周組織健康的重要保證，是決定正畸治療效果和穩(wěn)定性的關鍵。曾有學者將正畸力作用下牙周膜的生理反應活動看作是傷口愈合過程，因為它同瘢痕修復一樣包括細胞外基質結構的再生和

7、重建過程。他們發(fā)現(xiàn)高速率的膠原代謝是其顯著特征，隨刺激時間的延長，膠原的表迖呈時間依賴性變化［5,6］。牙周膜韌帶和細胞外基質纖維的主要成分中都包含多種類型的膠原成分［7］，到目前為止，在牙周組織中已發(fā)現(xiàn)的膠原成分有I、in、v、vi、xn、XIV型膠原。而I型膠原作為牙周膜固有纖維的主要成分，對穩(wěn)定牙一牙槽骨連接，承擔咀嚼力起著非常重要的作用［8］。本實驗也觀察到大鼠牙周膜中深染的I型膠原纖維，纖維致密、粗大，分布均勻。因此，I型膠原的變化在某種程度上代表了牙周膜對機械力的反應，通過觀察其合成與分解可以幫助我們大致認識牙周膜的代

8、謝更新情況。有研究證明：大鼠牙周膜中的膠原更新速度是其全身組織中最快的，它是牙齦的2倍、皮膚的4倍、骨的6倍，提示高速率的牙周膜更新是正畸牙移動的生物學基礎［9］。在機械力刺激下，牙周膜中的一系列信號傳導通路被激活，提高了I型膠原的合成速度，但同時