大鼠胰腺發(fā)育不同階段肝細(xì)胞生長(zhǎng)

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1、大鼠胰腺發(fā)育不同階段肝細(xì)胞生長(zhǎng)【摘要】目的研究肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體編碼基因cmet在大鼠胰腺發(fā)育不同階段的表達(dá)。方法采用高密度寡核苷酸芯片對(duì)孕12.5d（E12.5）、孕15.5d和孕18.5d、新生、成年胰腺進(jìn)行基因轉(zhuǎn)錄水平分析，并用RTPCR技術(shù)驗(yàn)證基因在大鼠胰腺不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)。結(jié)果cmet基因在E15.5、E18.5較成年特異性高表達(dá)。經(jīng)RTPCR驗(yàn)證，cmet基因表達(dá)趨勢(shì)與芯片結(jié)果相符；與芯片cmet探針?biāo)靡锊煌琑TPCR，結(jié)果卻在各發(fā)育階段呈現(xiàn)與芯片不同的表達(dá)趨勢(shì)。結(jié)論提示cmet可能在胰腺發(fā)育過程中起到調(diào)控作用，參與胚胎

2、胰腺發(fā)育中晚期細(xì)胞功能完善的信號(hào)傳導(dǎo)過程。并且cmet在胰腺發(fā)育中發(fā)揮作用有可能存在不同轉(zhuǎn)錄本?！娟P(guān)鍵詞】肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體編碼基因cmet胰腺生長(zhǎng)發(fā)育高通量寡核苷酸芯片RTPCR【Abstract】ObjectiveToinvestigatethefunctionofcmetinthedifferentdevelopmentstagesofratpancreas.MethodsUsingGeneChipExpressionSet230Atodetectthesignalvalueofdifferentdevelopmentstagesofrat

3、pancreas:E12.5，E15.5，E18.5，neet.Resultscmetexpresshighlyatratembryonicday15.5，18.5.ThecmetexpressiontrendencyofGeneChipsisconsistenterofRTPCRofhaveanotherresult.Conclusioncmetprotooncogenemayplaysaroleinthefunctionmaturationstagesofratpancreaticdevelopment.Theremaybedifferen

4、ttranscriptionsofcmetintheprogressionofratpancreaticmaturation.【Keyet，pancreaticdevelopment，genechips，RTPCR胰腺發(fā)育是一個(gè)復(fù)雜的過程，胰島結(jié)構(gòu)的形成和生物學(xué)功能發(fā)揮是一個(gè)重要環(huán)節(jié)。大鼠胚胎胰腺發(fā)育分為三個(gè)階段：①12.5d胰腺由胰腺上皮和間充質(zhì)細(xì)胞組成；②胚胎15.5d左右由胰腺上皮細(xì)胞分化而來的內(nèi)分泌細(xì)胞開始突破基底膜向間充質(zhì)遷移并逐漸相互聚集黏附；③胚胎18.5d左右基本形成了典型的胰島結(jié)構(gòu)［１］。完整的胰島結(jié)構(gòu)是胰腺發(fā)揮正常生物學(xué)功能的基礎(chǔ)

5、，了解完整胰島結(jié)構(gòu)的形成過程及功能完善調(diào)控機(jī)制對(duì)糖尿病發(fā)病機(jī)制及治療的研究有著重要的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用價(jià)值。目前，盡管對(duì)胰腺胚胎發(fā)育的研究在形態(tài)學(xué)上已明確，但分子網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機(jī)制上卻尚不明晰［２］。功能學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)在胰腺的整個(gè)發(fā)育過程中信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子起著非常重要的作用，如FGF,Hedgehog,Notch，TGFβ/activin等信號(hào)通路以及NF1(Tcf1),HNF1β(Tcf1β),HNF4(Tcf4),Pdx1,NeuroD1,Ngn3,Pax4,Pax6等轉(zhuǎn)錄因子［３，４］。胰島結(jié)構(gòu)形成是一個(gè)受細(xì)胞黏附及遷移等多因子調(diào)控的過程［5，6

6、］。本文以SD大鼠為模型，選取E15.5d、E18.5d及新生這三個(gè)大鼠胰腺發(fā)育和細(xì)胞功能完善的關(guān)鍵時(shí)期，通過affymetrix高通量多聚寡核苷酸芯片及RTPCR技術(shù)對(duì)cmet基因在胰腺發(fā)育不同階段的表達(dá)做出初步分析。為揭示cmet基因在胰腺發(fā)育細(xì)胞功能完善過程中的作用提供了一定依據(jù)。1材料與方法1.1材料成年SD大鼠60只，雌20只，雄40只，體質(zhì)量250g左右，由南京醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心提供。GeneChipMurineGenomeRAE230A芯片(Affymetrix公司)。mastercyclerPCR儀(Eppendorf公司),Triz

7、olReagent(美國(guó)Gibco公司),RNAeasyMiniKit(Qiagen),RTPCR試劑盒(Tayobo)。1.2方法1.2.1組織取材：于6:00時(shí)，將雌雄以1∶2合籠，次日檢測(cè)有陰栓者，定為受精0.5d(E0.5)，取E12.5，E15.5和E18.5胚胎胰腺以及新生鼠胰腺；取懷有胚胎E12.5、E15.5和E18.5的母鼠，引頸處死，分離出胚胎，顯微解剖鏡下用顯微鑷子取出胰腺后，迅速在液氮中冷凍。新生和成年鼠直接分離出胰腺［7］。1.2.2胰腺發(fā)育各階段芯片制備：用TrizolmReagent提取大鼠E12.5、E15.5、E18.

8、5、新生和成年胰腺總RNA，利用RNAeasyMiniKit純化總RNA。寡核苷