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1、HPLC法測定20種中藥飲片中蘆丁的含量【關(guān)鍵詞】中藥；蘆??；高效液相色譜法【Abstract】ObjectiveToestablishHPLCmethodfordeterminationofthecontentofrutinin20kindsofChineseherbalmedicines.MethodsTheHPLCn(5μm，250mm×4.6mm)obilephasel/min.Thedetectiveandcolumntemperatureat30℃.ResultsTheareaunderthepeakofchromatographyisve
2、ryethodissimpleandaccurate.Theexperimentalresultsareveryreproducible.Undertheconditionsasstatedinthemethodsection，therutincanbeseparatedvery20kindsofChineseherbalmedicines.TheconcentrationoftheRutin，therefore，canbeaccuratelydetermined.【Keyedicines；rutin；HPLC蘆丁，即蕓香苷，是中藥飲片中較多見的一種黃
3、酮類成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及維生素P樣等作用。有關(guān)蘆丁的HPLC測試方法已有很多報道［1～3］，筆者采用反相高效液相色譜法在50余種常用中藥飲片中分離、檢測蘆丁成分，經(jīng)在時間軸上（調(diào)節(jié)色譜條件以使出峰保留時間在10～35min范圍內(nèi)改變）反復(fù)與蘆丁對照品比較，最后確認(rèn)其中的20種中藥飲片中含有較高的黃酮類物質(zhì)蘆丁。文獻(xiàn)曾報道該20種藥材中的8種含有蘆丁［3，4］，但具體含量不詳，筆者查閱國內(nèi)有關(guān)文獻(xiàn)，未發(fā)現(xiàn)在另12種藥材中也含有蘆丁的最新報道。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可供有關(guān)科研和臨床工參考。1實(shí)驗(yàn)研究1.1儀器和試藥250mm×4.6mm）；流動相：乙腈∶水（
4、8∶92～30∶70)，加磷酸調(diào)pH至2.6；流速：0.8ml/min；檢測波長為254nm，柱溫為30℃。1.3對照品溶液配制精密稱取蘆丁對照品1.9mg，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，置超聲波中振蕩溶解，精密吸取該標(biāo)準(zhǔn)溶液0.01ml、0.05ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml，置1ml定量管中，用淋洗液稀釋至刻度備用。1.4樣品處理取上述三批50種藥材的干燥樣品各50g，打成粗粉，對應(yīng)混合，各稱取3份，每份2g，置150只100ml大口瓶中，各加50ml甲醇，超聲波中振搖15min后浸泡過夜，吸取上清液，經(jīng)離心，0.45μm濾膜過濾，C1
5、8固相萃取器萃取后，用淋洗液稀釋5倍待測。1.5定性分析調(diào)整流動相中乙腈和水的比例，使蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時間控制在10min左右，取上述各待測樣品，吸取5μl進(jìn)樣，初步確定該條件下的樣品峰型后，加適量蘆丁對照品稀釋液于該待測樣品中（使樣品中的對應(yīng)蘆丁峰面積增大1～2倍），再逐次調(diào)整流動相比例，使蘆丁的出峰時間從10～35min不斷延后，觀察每次進(jìn)樣出峰時蘆丁標(biāo)準(zhǔn)峰與樣品中的蘆丁特定峰是否完全重疊或重疊峰中有肩峰出現(xiàn)，經(jīng)反復(fù)比較，觀察全過程中重疊峰形態(tài)完好的，無肩峰或樣品中的特定峰出現(xiàn)再分離現(xiàn)象的樣品，由此確定其蘆丁的成分，見圖1。圖1是苦丁茶樣品及加蘆丁
6、標(biāo)準(zhǔn)品后的對照圖譜。上述50種被測樣品中，符合該定性分析要求的樣品有20種。A.苦丁茶樣品(HerbaCorydalisbungeanae)B.苦丁樣品+蘆丁對照品(HerbaCordalisbungeanae+referencesubstanceofRutin)1.蘆丁(Rutin)圖1色譜圖1.6線性范圍精密吸取3種蘆丁對照品稀釋液各5μl進(jìn)樣（流動相中的乙腈和水的比例視藥材的峰型而定，其他條件不變。對上述含蘆丁的20種藥材每種都作出其相應(yīng)的回歸方程，這里僅列出3個特殊點(diǎn)上的回歸方程Y1、Y2和Y3），記錄峰面積，重復(fù)3次取平均值。以對照品溶液濃度
7、（X）與其相應(yīng)峰面積（Y）求得回歸方程和相關(guān)系數(shù)為：Y1=1.484×106X+1420，r=0.9999。（乙腈∶水=30∶70）Y2=1.405×106X+1685，r=0.9998。（乙腈∶水=20∶80）Y3=1.316×106X+1329，r=0.9999。（乙腈∶水=10∶90）線性范圍：0.0095μg～0.3800μg1.7回收率測試稱取符合定性要求的20種樣品粉末各2g3份，置60只100ml量瓶中，選擇3種上述稀釋的對照品溶液，分別加入1ml，同樣品處理方法處理后進(jìn)樣，記錄峰面積，同時以同種相同量對照品稀釋液直接進(jìn)樣的峰面積為對照，
8、計(jì)算回收率。測得20種試液的平均回收率見表1，RSD值見表1中RSD1。1.8精密度、重復(fù)性及
