hplc法測定茯磚茶中蘆丁含量

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1、HPLC法測定茯磚茶中蘆丁含量建立了茯磚茶中主要黃酮類物質(zhì)蘆丁的高效液相色譜測定方法。采用HypersilODS色譜柱C18色譜柱，流動(dòng)相：A乙腈；B磷酸溶液(pH=2.5)，梯度洗脫，流速1mL/min，檢測波長258nm，樣量為20?L，柱溫30℃。對(duì)照品蘆丁的回歸方程Y=16007.7ρB(?g/mL)-11115.2,R=0.9993，線性范圍為10.000~80.000mg/L，平均回收率99.0100%，RSD為2.0700%。測得茯磚茶中蘆丁含量為0.1435%，RSD為3.4900%。該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可用于茯磚茶中蘆丁含量的測定。關(guān)鍵詞：茯磚茶；蘆??；HPLC基

2、金項(xiàng)目：湖南省科技廳重大研究項(xiàng)目(2009NK2004)；湖南省高校產(chǎn)學(xué)研合作示范基地產(chǎn)業(yè)化項(xiàng)目(11CY003)；2010年湖南省高校產(chǎn)學(xué)研合作示范基地建設(shè)項(xiàng)目(項(xiàng)教通[2010]235號(hào))；湖南城市學(xué)院科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011xj001)?！　　〗陙碓S多藥理研究表明，黃酮類物質(zhì)在防止皮膚疾病[1]、增強(qiáng)免疫力和預(yù)防心血管疾病[2]以及抗氧化活性[3]等方面具有重要生物活性與功效，而蘆丁是黃酮類物質(zhì)中典型的代表之一。筆者用蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品，建立了測定茯磚茶提取液中蘆丁的高效液相色譜方法。目前，對(duì)茶葉中黃酮類物質(zhì)的分析方法主要有分光光度法、高效液相色譜法(HPLC)[4-5]。分光光度法

3、的靈敏度較差，且只能夠測出總黃酮，無法具體得出蘆丁的含量。高效液相色譜法因其靈敏度高、專一性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，是目前測定黃酮類物質(zhì)的主流方法。梯度洗脫高效液相色譜存在分析時(shí)間長或分離效果差的缺點(diǎn)，后來開發(fā)的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS)法[6]雖然可以克服上述缺點(diǎn)，但儀器昂貴，不適用于常規(guī)分析檢測。筆者提出一種簡便、有效的HPLC梯度洗脫分析方法，分析測定茯磚茶中的主要黃酮類成分蘆丁的含量，并對(duì)此方法進(jìn)行了方法的系統(tǒng)考察。1材料和方法1.1儀器與試劑高效液相色譜儀(島津公司)，包括LC-10AT型輸液泵，SPD-10A型紫外檢測器；HypersilODS色譜柱(150.0mm×4.

4、6mm，5.00?m，依利特公司)，U3010紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)，HT-250型超聲波清洗機(jī)(山東濟(jì)寧亨通電子設(shè)備廠)，乙腈(色譜純),磷酸(分析純)，2次蒸餾水(自制)，蘆丁(澤朗醫(yī)藥科技公司)，茯磚茶產(chǎn)自安化，由益陽茶廠有限公司提供。1.2對(duì)照品溶液的配制準(zhǔn)確稱取干燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.080mg，用乙醇溶解定容至100.0mL，搖勻后超聲處理5.0min，得濃度為0.1008g/L的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液，裝入棕色瓶中保存?zhèn)溆谩?.3供試品溶液的配制稱取5.0000g茯磚茶，加95%乙醇100.0mL，回流提取60.0min，過濾，取2.5mL濾液，加乙醇定容至10.0mL

5、，過0.45?m微孔濾膜，作為供試品溶液。1.4色譜條件HypersilODS色譜柱，流動(dòng)相：A為乙腈，B為磷酸溶液(pH=2.5)，梯度洗脫，流動(dòng)相流速1.0mL/min，柱溫30℃，紫外檢測波長為258nm，進(jìn)樣量20?L。洗脫程序?yàn)?.0～6.0min，8.0000%A～15.0000%A；6.0～15.0min，15.0000%A～30.0000%A；15.0～25.0min，30.0000%A～8.0000%A，25.0～30.0min，8.0000%A停泵[1]。2結(jié)果與分析2.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別取加入了對(duì)照品的供試品溶液，供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，按上述色譜

6、條件測定，記錄色譜圖，供試品（紅色線）和加入了蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的供試品（藍(lán)色線）的色譜圖，如下，在19.6min處，供試品譜圖有個(gè)較小的峰，加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品譜圖在對(duì)應(yīng)位置有個(gè)稍大的峰，對(duì)照可知蘆丁的保留時(shí)間為19.6min。2.2檢測波長的選擇蘆丁紫外吸收光譜圖顯示，分別在212，258和362nm3處具有峰值吸收。其中212nm附近的吸收值最大，但干擾也大；362nm處雖干擾可能最小，但其吸收值也最小。故選擇檢測波長為258nm[2]。2.3流動(dòng)相的選擇甲醇和乙腈是最常用的兩種液相色譜流動(dòng)相。初步實(shí)驗(yàn)表明，以甲醇作為流動(dòng)相的分離效果和檢測靈敏度均明顯不如以乙腈作為流動(dòng)相。流動(dòng)相中加入酸有助于

7、各組分的分離和得到較好的峰型，含不同的酸(磷酸和乙酸)對(duì)分離效果也有重要影響。用含有乙酸的流動(dòng)相時(shí)，流出物色譜峰形拖尾嚴(yán)重，而改用含有磷酸的流動(dòng)相時(shí)，分離效果就有較大改善；酸的濃度也有影響，流動(dòng)相的pH不宜低于2.5?？疾旄淖円译婧土姿岬谋壤龝r(shí)發(fā)現(xiàn)，乙腈濃度為30.0000%為宜，當(dāng)乙腈濃度過高時(shí)，出峰時(shí)間提前，但不利于各個(gè)組分的分離。2.4線性回歸方程、檢測限分別移取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液于10.0mL容量瓶中，