hplc法測定茯磚茶中蘆丁含量

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1、HPLC法測定茯磚茶中蘆丁含量建立了茯磚茶中主要黃酮類物質(zhì)蘆丁的高效液相色譜測定方法。采用HypersilODS色譜柱C18色譜柱，流動相：A乙腈；B磷酸溶液(pH=2.5)，梯度洗脫，流速1mL/min，檢測波長258nm，樣量為20?L，柱溫30℃。對照品蘆丁的回歸方程Y=16007.7ρB(?g/mL)-11115.2,R=0.9993，線性范圍為10.000~80.000mg/L，平均回收率99.0100%，RSD為2.0700%。測得茯磚茶中蘆丁含量為0.1435%，RSD為3.4900%。該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可用于茯磚茶中蘆丁含量的測定。關(guān)鍵詞：茯磚茶；蘆??；HPLC基

2、金項目：湖南省科技廳重大研究項目(2009NK2004)；湖南省高校產(chǎn)學(xué)研合作示范基地產(chǎn)業(yè)化項目(11CY003)；2010年湖南省高校產(chǎn)學(xué)研合作示范基地建設(shè)項目(項教通[2010]235號)；湖南城市學(xué)院科技計劃項目(2011xj001)?！　　〗陙碓S多藥理研究表明，黃酮類物質(zhì)在防止皮膚疾病[1]、增強免疫力和預(yù)防心血管疾病[2]以及抗氧化活性[3]等方面具有重要生物活性與功效，而蘆丁是黃酮類物質(zhì)中典型的代表之一。筆者用蘆丁作為標(biāo)準(zhǔn)品，建立了測定茯磚茶提取液中蘆丁的高效液相色譜方法。目前，對茶葉中黃酮類物質(zhì)的分析方法主要有分光光度法、高效液相色譜法(HPLC)[4-5]。分光光度法

3、的靈敏度較差，且只能夠測出總黃酮，無法具體得出蘆丁的含量。高效液相色譜法因其靈敏度高、專一性強等優(yōu)點，是目前測定黃酮類物質(zhì)的主流方法。梯度洗脫高效液相色譜存在分析時間長或分離效果差的缺點，后來開發(fā)的高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MS)法[6]雖然可以克服上述缺點，但儀器昂貴，不適用于常規(guī)分析檢測。筆者提出一種簡便、有效的HPLC梯度洗脫分析方法，分析測定茯磚茶中的主要黃酮類成分蘆丁的含量，并對此方法進行了方法的系統(tǒng)考察。1材料和方法1.1儀器與試劑高效液相色譜儀(島津公司)，包括LC-10AT型輸液泵，SPD-10A型紫外檢測器；HypersilODS色譜柱(150.0mm×4.

4、6mm，5.00?m，依利特公司)，U3010紫外可見分光光度計(日本島津公司)，HT-250型超聲波清洗機(山東濟寧亨通電子設(shè)備廠)，乙腈(色譜純),磷酸(分析純)，2次蒸餾水(自制)，蘆丁(澤朗醫(yī)藥科技公司)，茯磚茶產(chǎn)自安化，由益陽茶廠有限公司提供。1.2對照品溶液的配制準(zhǔn)確稱取干燥恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.080mg，用乙醇溶解定容至100.0mL，搖勻后超聲處理5.0min，得濃度為0.1008g/L的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液，裝入棕色瓶中保存?zhèn)溆谩?.3供試品溶液的配制稱取5.0000g茯磚茶，加95%乙醇100.0mL，回流提取60.0min，過濾，取2.5mL濾液，加乙醇定容至10.0mL

5、，過0.45?m微孔濾膜，作為供試品溶液。1.4色譜條件HypersilODS色譜柱，流動相：A為乙腈，B為磷酸溶液(pH=2.5)，梯度洗脫，流動相流速1.0mL/min，柱溫30℃，紫外檢測波長為258nm，進樣量20?L。洗脫程序為0.0～6.0min，8.0000%A～15.0000%A；6.0～15.0min，15.0000%A～30.0000%A；15.0～25.0min，30.0000%A～8.0000%A，25.0～30.0min，8.0000%A停泵[1]。2結(jié)果與分析2.1系統(tǒng)適用性試驗分別取加入了對照品的供試品溶液，供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，按上述色譜

6、條件測定，記錄色譜圖，供試品（紅色線）和加入了蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的供試品（藍色線）的色譜圖，如下，在19.6min處，供試品譜圖有個較小的峰，加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品譜圖在對應(yīng)位置有個稍大的峰，對照可知蘆丁的保留時間為19.6min。2.2檢測波長的選擇蘆丁紫外吸收光譜圖顯示，分別在212，258和362nm3處具有峰值吸收。其中212nm附近的吸收值最大，但干擾也大；362nm處雖干擾可能最小，但其吸收值也最小。故選擇檢測波長為258nm[2]。2.3流動相的選擇甲醇和乙腈是最常用的兩種液相色譜流動相。初步實驗表明，以甲醇作為流動相的分離效果和檢測靈敏度均明顯不如以乙腈作為流動相。流動相中加入酸有助于

7、各組分的分離和得到較好的峰型，含不同的酸(磷酸和乙酸)對分離效果也有重要影響。用含有乙酸的流動相時，流出物色譜峰形拖尾嚴(yán)重，而改用含有磷酸的流動相時，分離效果就有較大改善；酸的濃度也有影響，流動相的pH不宜低于2.5?？疾旄淖円译婧土姿岬谋壤龝r發(fā)現(xiàn)，乙腈濃度為30.0000%為宜，當(dāng)乙腈濃度過高時，出峰時間提前，但不利于各個組分的分離。2.4線性回歸方程、檢測限分別移取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液于10.0mL容量瓶中，