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1、超微歸脾丸對(duì)D桂卉，文雅萍，鄒龍，劉東文，蔡光先【摘要】目的研究超微歸脾丸的抗衰老作用及其機(jī)制。方法背部皮下注射D-半乳糖造衰老小鼠模型，造模同時(shí)連續(xù)灌胃給藥45d后，測(cè)定肝臟及腦組織的抗氧化指標(biāo)(MDA，SOD.freelin，加熱回流煎煮1.5h，離心過(guò)濾，濾渣加10倍量的水加熱回流煎煮1.0h，離心過(guò)濾，合并濾液，濃縮成濃縮液，濃縮液置蒸發(fā)皿中蒸干，置真空烘箱內(nèi)60℃真空干燥，得干浸膏。干浸膏粉碎成100目浸膏粉，泛制成丸，干燥得普通歸脾丸。2.2超微歸脾丸的制備稱取10倍處方量(除木香、白術(shù)、茯苓)各藥材超微飲片，加10倍量的水，浸泡30
2、min，75℃下進(jìn)行動(dòng)態(tài)提取1.5h，離心過(guò)濾，濾渣加8倍量的水，再提取1.0h，離心過(guò)濾，合并濾液，濃縮成濃縮液，濃縮液置蒸發(fā)皿中蒸干，置真空烘箱內(nèi)60℃真空干燥，得干浸膏;木香、白術(shù)經(jīng)CO2超臨界流體萃取得揮發(fā)油，揮發(fā)油用β-環(huán)糊精包合，得揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物，藥渣與處方其它藥物合并提取;干浸膏粉碎成100目浸膏粉，再與茯苓超微粉、揮發(fā)油包合物混勻泛制成丸，干燥得超微歸脾丸。2.3動(dòng)物分組取小鼠60只,.freelg·kg-1·d-1的3%D-半乳糖生理鹽水溶液，1次/d，連續(xù)45d。2.5給藥方法將普通歸脾丸、超微歸脾丸均用蒸餾水溶解，配
3、成相當(dāng)于生藥材1.0g/ml的藥液，超微歸脾丸低、中、高劑量組均灌服超微歸脾丸藥液，普通歸脾丸組灌服普通歸脾丸藥液。根據(jù)日服用劑量，按人體模型表面積換算后給藥劑量分別為：超微歸脾丸高劑量組15.50g/(kg·d)、中劑量組8.00g/(kg·d)、低劑量組3.89g/(kg·d)，普通歸脾丸組按超微歸脾丸中劑量組給藥，模型組、空白對(duì)照組給予中劑量同體積生理鹽水。2.6指標(biāo)測(cè)定連續(xù)給藥45d后，頸椎脫臼處死小鼠。取胸腺、脾、肝稱重測(cè)定臟器指數(shù);同時(shí)將肝及腦制成1%組織勻漿(組織勻漿的制備按試劑盒說(shuō)明)，按試劑盒中方法測(cè)定肝及腦組織SOD的活力、M
4、DA的含量、GSH-Px活性。2.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)均采用SPSS12.0軟件完成統(tǒng)計(jì)處理。結(jié)果以±s表示;計(jì)量資料組間差異比較采用t檢驗(yàn)。3結(jié)果3.1各歸脾丸對(duì)小鼠胸腺、脾、肝臟指數(shù)的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，與模型組比較，各歸脾丸組均能顯著提高亞急性衰老小鼠模型的鼠的臟器指數(shù)(P0.05，P0.01)，超微歸脾丸低、中劑量組與普通歸脾丸組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，超微歸脾丸高劑量組與普通歸脾丸組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05，P0.01)。從胸腺、脾臟器指數(shù)的比較可知，普通歸脾丸組與超微歸脾丸各劑量之間無(wú)明顯區(qū)別，同時(shí)超微歸脾丸各劑量之間
5、也無(wú)顯著性差異。表1各歸脾丸對(duì)小鼠胸腺、脾臟、肝臟的影響與模型組比較，●P0.01，▲P0.05;與普通歸脾丸組比較，◆P0.01，■P0.05;n=53.2各組小鼠肝臟MDA含量、SOD和GSH-Px活性測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2，與模型組比較，普通歸脾丸組、超微歸脾丸低、中、高劑量組的肝MDA含量、SOD和GSH-Px活性都具有顯著性差異(P0.05)。與普通歸脾丸組相比較，超微歸脾丸低、中、高劑量組的肝MDA含量和SOD都有顯著性差異(P0.01);與普通歸脾丸組相比較，超微歸脾丸中、高劑量組的GSH-Px活性明顯升高(P0.01)，但超微歸脾丸低劑量
6、組卻無(wú)顯著性差異。表2不同組別小鼠肝組織中MDA含量、SOD和GPX活性檢測(cè)結(jié)果與模型組比較，●P0.01，▲P0.05;與普通歸脾丸組比較，◆P0.01，■P0.05;n=53.3各組小鼠腦MDA含量、SOD和GSH-Px活性測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。與模型組比較，普通歸脾丸組、超微歸脾丸低、中、高劑量組的腦MDA含量、SOD和GSH-Px活性都有顯著性差異(P0.05，P0.01)。與普通歸脾丸組比較，超微歸脾丸低、中、高劑量組的腦MDA含量、SOD和GSH-Px活性均無(wú)明顯區(qū)別。表3不同組別小鼠腦組織中MDA含量、SOD和GPX活性檢測(cè)結(jié)果與模型組比
7、較，●P0.01，▲P0.05;與普通歸脾丸組比較，◆P0.01，■P0.05;n=54討論本實(shí)驗(yàn)通過(guò)小鼠頸背部皮下注射300mg/(kg·d)的3%D-半乳糖生理鹽水溶液，連續(xù)注射45d造亞急性小鼠衰老模型。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知：模型組小鼠肝、腦的各抗氧化指標(biāo)明顯高于或低于空白對(duì)照組，重要的組織器官胸腺、脾以及肝臟顯著性萎縮，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)造模成功。MDA是一種脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，能引起細(xì)胞代謝及功能障礙，因而引起細(xì)胞損傷，進(jìn)而加速機(jī)體衰老3，4;SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力5;GSH-Px是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的催化過(guò)氧化氫酶6，測(cè)
8、定GSH-Px可以間接的反應(yīng)細(xì)胞的完整程度。飼養(yǎng)動(dòng)物45d后，給予歸脾丸的各組小鼠的抗氧化指標(biāo)如肝、腦的MDA含量、SOD和GSH-Px
