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《感染性疾病病原的診斷策略(講座)》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、感染性疾病病原的診斷策略在我們的日常生活中,小到一個(gè)皮膚創(chuàng)衛(wèi),大到肺炎,肝炎,性傳播疾病,都有感染聲音的存在。在感染性疾病的診療過程中,對于其感染性病原體的診斷處于一個(gè)非常重要的位置,因?yàn)樗葞椭覀兇_定疾病的病原,又指導(dǎo)我們后期的治療與用藥,可以說是一個(gè)不可或缺的因素。但我們都知道,造成感染性病原體的千差萬別,他們都具有不同的生物學(xué)特性,這就迫使我們用策略和手段去尋找他們。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,微生物學(xué)的鑒定和專斷技術(shù)也有了長足的進(jìn)步一、病原診斷策略的分類如今病原學(xué)的診斷技術(shù)多種多樣,從最簡單的手工平板劃線分離到最常規(guī)的自動(dòng)化細(xì)菌鑒定儀,到最新的DNA測取技術(shù),病原學(xué)的診斷技術(shù)幾乎覆
2、蓋了醫(yī)學(xué)微生物學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)的方方面面,具有很長的交叉性,這個(gè)問題看起來似乎復(fù)雜,沒有頭緒,但是我們能夠認(rèn)真梳理還是很容易的理出一條主線,其實(shí)無論什么方法,都能歸入兩個(gè)大類。一類是以病原體表現(xiàn)型為基礎(chǔ)的方法;另一類是以病原體基因型為基礎(chǔ)的方法,所以表現(xiàn)型就是病原體直接表型出的一些性狀,其物理學(xué)性狀、生化反應(yīng)特性、免疫學(xué)特性,特性可以通過平板劃線分離,生化反應(yīng),血性型實(shí)驗(yàn)的檢測出來。從分子微生物學(xué)的角度講,表現(xiàn)型是病原體基因組,特別是一些活躍的基因經(jīng)過轉(zhuǎn)入翻譯后的外在表現(xiàn),雖然只能體現(xiàn)病原體基因組的部分特征,但是由于針對其實(shí)驗(yàn)技術(shù)成熟,操作方便,成本相對低廉,因此,仍然是當(dāng)今
3、病原體診斷的常規(guī)技術(shù),相比之下以基因型為基礎(chǔ)的方法更加接近病原體的本質(zhì),因?yàn)榛蚪M的存在了病原組的全部遺傳信息,以基因性為基礎(chǔ)的方法大致可以分為基于退性基因的檢測,以及基于測序的兩大手段。前者主要針對退役性基因,這些基因包含了病原體的某些種系特征,該方法快速特異,但鑒于臨床標(biāo)本千差萬別,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)敏感性問題。而后者主要基于病原體DNA剪輯系列,可以說做到了觸及病原體的本質(zhì),是當(dāng)今所有檢測技術(shù)的基因標(biāo)準(zhǔn),但是由于經(jīng)濟(jì)成本和標(biāo)準(zhǔn)化的問題還很難廣泛推廣,不可否認(rèn)它將是未來診斷技術(shù)的趨勢和發(fā)展方向。二、以表現(xiàn)型為基礎(chǔ)的方法(一)基因物理學(xué)特性和生化反應(yīng)的診斷在整個(gè)微生物的發(fā)展歷史中,人類經(jīng)歷
4、了經(jīng)驗(yàn)時(shí)期、現(xiàn)代微生物學(xué)時(shí)期這幾個(gè)重要的歷史階段,在1670年荷蘭人發(fā)明了顯微鏡,第一次揭示了微生物世界的存在,開始人類進(jìn)入了實(shí)驗(yàn)時(shí)期,從那以后至今300多年的時(shí)間里,通過多種多樣的實(shí)驗(yàn)方法來鑒別不同微生物的物種間的不同性質(zhì);這其中有形態(tài)學(xué)的方法最基本的格蘭染色,鑒定白喉棒狀桿菌的染色。鑒定結(jié)核分枝桿菌的抗酸染色,也有基于生化反應(yīng)的方法,如平板考察腸道細(xì)菌對于乳糖分解能力的不同以確定致病菌株,運(yùn)用了整合了四個(gè)生化反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)鑒定了不同的腸道桿菌的方法雖然這些方法被視作經(jīng)費(fèi)的保留下來再醫(yī)學(xué)上廣泛和大量的應(yīng)用 但是手工操作存在效率偏低的疫病。而隨著工業(yè)化的推進(jìn)和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,其中很多
5、方法被系統(tǒng)化集成化標(biāo)準(zhǔn)化,許多手工作業(yè)被自動(dòng)化儀器所取代,這樣便催生了自動(dòng)化鑒定技術(shù),手工鑒定和自動(dòng)化鑒定技術(shù)可以說相同原理在不同技術(shù)條件下的不同形式,但不可否認(rèn)無論效率的高低它們都是基于相同的經(jīng)典微生物學(xué)理論。雖然在高技術(shù)條件下的今天,許多手工操作的方法已經(jīng)瀕臨淘汰,但是在一些基礎(chǔ)條件欠發(fā)達(dá)的地區(qū),在一些經(jīng)驗(yàn)性診斷已經(jīng)相當(dāng)成熟的疾病面前,經(jīng)典的手工操作方法以及低技術(shù)要求,低成本的獨(dú)特魅力在高科技的加分中仍然取得了一席之地,上圖中為我們展示了幾種比較經(jīng)典的手工操作方法,讓我們先來看最左邊的一張,這張圖片給我們展現(xiàn)給我們的是平板劃線分離的方法,將含有多種細(xì)菌的菌液圖鋪在同一個(gè)題板上,經(jīng)
6、過一段時(shí)間的培養(yǎng),可以根據(jù)菌落的特性辨別出不同的細(xì)菌,在圖中我們可以看出兩種明顯不同的菌落,一種菌落較大,明顯來源于不同的菌種,經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)者往往能直接通過菌落的顏色、光澤、干濕、外形的信息做出初步的診斷,同時(shí)這種方法也是自動(dòng)化細(xì)菌檢定儀的第一道工序中間農(nóng)業(yè)的格蘭染色,在圖中所指區(qū)域,可以找到大量格蘭陰性的球菌集合。病人不檢性生活史、尿急尿痛的尿道刺激征,我們很容易做到林秋菌性尿道炎的診斷,而無需進(jìn)一步的微生物學(xué)檢查;第三張圖展示的是甲乙丙的三種鏈球菌在血滴板上不同溶血快的特征,在12點(diǎn)中方向是不溶血的典型溶血性球菌,在五點(diǎn)中方向生長的是完全溶血的的隱形溶血的,在7點(diǎn)溶血的是不完全
7、溶血的甲型溶血性鏈球菌,鏈球菌是常見的人體的致命菌,菌落特征很難區(qū)別只有通過溶血的特點(diǎn)才能完全區(qū)別,因此血平板的培養(yǎng)的也是不錯(cuò)的區(qū)別不同細(xì)菌的方法。以上我們講解的比較經(jīng)典的手工操作的方法 但是我們知道手工操作存在人為影響 因素多 主觀因素強(qiáng) 這樣可以控制效率工作的缺點(diǎn)及檢查以及很難想象 是如今對于醫(yī)療條件的要求,由于工業(yè)化和標(biāo)準(zhǔn)化的問題 自動(dòng)化鑒定技術(shù)也意義而深了 我們知道一個(gè)菌種面對不同的反應(yīng)物有不同的反應(yīng)結(jié)果,一個(gè)菌種也會(huì)產(chǎn)生不同的結(jié)果;將這些反應(yīng)結(jié)果