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1、Survivin、caspase【摘要】目的 探討大腸癌伴血吸蟲病中Survivin、Caspase-3、AKT1蛋白的表達(dá)及其意義。方法采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)40例大腸癌伴血吸蟲病中Survivin、Caspase-3、AKT1蛋白的表達(dá)，并與35例不伴血吸蟲病的大腸癌及40例正常結(jié)腸粘膜作對(duì)照。結(jié)果AKT1在大腸腺癌中的表達(dá)與正常大腸粘膜相比有顯著意義(P<0.01)，在大腸腺癌中Survivin的陽性率與正常大腸粘膜相比，差異具有顯著性意義(P<0.01)，caspase-3在大腸腺癌中的陽性表達(dá)率與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。A
2、KT1在大腸腺癌不伴血吸蟲病、伴血吸蟲病中陽性表達(dá)率分別為85.7%和82.5%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Survivin在大腸腺癌不伴血吸蟲病、伴血吸蟲病中表達(dá)率分別為91.4%，90.0%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。caspase-3在大腸腺癌不伴血吸蟲病、伴血吸蟲病中表達(dá)率分別為57.1%，62.5%;差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論在大腸癌變過程中起重要作用的三種基因(AKT1、Survivin、caspase)的改變與血吸蟲病無明確關(guān)系，因此血吸蟲病與大腸癌之間的關(guān)系還需進(jìn)一步探討?！娟P(guān)鍵詞】大腸癌伴血吸蟲病;凋亡抑
3、制因子;細(xì)胞周期調(diào)控 目前對(duì)大腸癌的發(fā)生、發(fā)展已進(jìn)行多方面的研究,但大腸癌伴血吸蟲病的相關(guān)研究報(bào)道不多。AKT1是細(xì)胞生存通路PI3K/AKT的關(guān)鍵分子，其持續(xù)活化與組織增殖密切相關(guān)，Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)最強(qiáng)的凋亡抑制因子，具有抑制凋亡效應(yīng)蛋白酶Caspase活性、參與細(xì)胞周期調(diào)控及調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂等多種生物學(xué)作用。細(xì)胞凋亡的異常與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),而Caspase-3在凋亡過程中起著重要的作用。為此,我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大腸癌伴血吸蟲病組織中AKT1、Surviving、Caspase-3蛋白的表達(dá),以探討血吸蟲感染與大腸癌發(fā)生的關(guān)系?！ ?材料與
4、方法 1.1研究對(duì)象標(biāo)本取自我院病理科2002年至2005年期間手術(shù)大腸腺癌標(biāo)本75例,男性39例，女性36例，年齡36～79歲，平均48歲;年齡<60歲者36例，≥60歲者39例。腫瘤病理分級(jí)：高分化腺癌28例、中分化腺癌35例、低分化腺癌12例。其中40例大腸腺癌中見鈣化血吸蟲卵沉積。采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)40例大腸癌伴血吸蟲病組織中Survivin、Caspase-3、AKT1蛋白的表達(dá)水平，并與35例不伴血吸蟲病的大腸癌及40例正常結(jié)腸粘膜組織作對(duì)照(大腸粘膜伴/不伴血吸蟲病各20例)?！ ?.2研究方法標(biāo)本均經(jīng)10%的甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚4～
5、5um，載玻片經(jīng)多聚賴氨酸處理，防止脫片。微波抗原修復(fù)。鼠抗人AKT1免疫組化單克隆抗體，兔抗人Survivin免疫組化多克隆抗體，鼠抗人caspase-3免疫組化單克隆抗體兔抗人，免疫組化試劑盒、DAB顯色劑試劑盒均購(gòu)自福州邁新公司。染色步驟按試劑盒說明書操作。PBS沖洗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水透明，樹膠封片。以PBS代替一抗作陰性對(duì)照。光鏡下任取4個(gè)高倍視野進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，至少計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，AKT1陽性著色定位于細(xì)胞的胞質(zhì)和(或)胞膜，呈淡黃～棕黃色細(xì)顆粒狀，局灶或彌漫性分布。Survivin陽性著色主要定位于細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核上，呈淡黃～棕黃色細(xì)顆粒狀
6、，陽性細(xì)胞呈局灶或彌漫性分布。caspase-3的陽性著色在細(xì)胞的胞質(zhì)中，呈淡黃～棕黃色細(xì)顆粒狀，局灶或彌漫性分布。采用半定量積分法[1-3]判定免疫組化染色結(jié)果：計(jì)算陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)并賦予分值，≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，﹥75%為4分;觀察著色強(qiáng)度并賦予分值，無著色為0分，淺黃著色為1分，黃色為2分，棕黃著色為3分，兩者相乘，0分為(-)，1～4分為(+)，5～8分為(++)，9～12分為(+++)?！ ?.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0進(jìn)行處理。AKT1、Survivin、caspase-3在大腸腺癌與
7、對(duì)照組間的表達(dá)差異用四格表的χ2檢驗(yàn)，Spearman秩相關(guān)進(jìn)行AKT1、Survivin、caspase-3間的相關(guān)性分析，P=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，P<0.05差異有顯著性意義，P<0.01差異有非常顯著性意義?！ ?結(jié)果 2.1AKT1在大腸腺癌中的表達(dá)AKT1在正常大腸粘膜不伴血吸蟲病、正常大腸粘膜伴血吸蟲病、大腸腺癌不伴血吸蟲病、大腸腺癌伴血吸蟲病中表達(dá)率依次為15%，10%，85.7%和82.5%;其在大腸腺癌與正常大腸粘膜中的表達(dá)率相比，差異有非常顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但在大腸腺癌不伴血吸蟲病與大腸腺癌伴血
