不同濃度bme對(duì)大鼠胚胎脊髓神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化

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1、不同濃度BME對(duì)大鼠胚胎脊髓神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化【關(guān)鍵詞】神經(jīng)干細(xì)胞Effectofβmercaptoethanolonproliferationanddifferentiationofneuralstemcellsfromembryonicrats　　【Abstraet】AIM:ToexploretheeffectsofdifferentconcentrationsofβMercaptoethanol(BME)inDFI2containing10mL/Lfetalco(FCS)ontheproliferationanddiffe

2、rentiationofneuralstemcellsfromratembryonicspinalcord.METHODS:Econtaining10mL/LFCStoinduceNSCsinvitro,observedthecellsinthreephases,identifiedthedifferentiationusingimmunocytochemistrybyGFAPandNSE24hlater,andanalyzedtheresults.RESULTS:Proliferationmol/Lorlmmol/L)andFC

3、SoronlybyFCS.ThedifferentiationrateofNSCstoneuronsinducedbyBME(0.5mmol/L)mol/L)significantlyincreasedto58%.ThedifferentiationrateofastrocytesinducedbyBME(0.5mmol/Lorlmmol/L)andFCSoronlybyFCSecelltoxicity.TheeffectofBMEbineduchbetterthanthatofusingonlyBMEorFCS.　　【keyer

4、captoethanol(BME);neuralstemcells;celldifferantiation　　【摘要】目的：觀察含10ml/L血清的不同濃度的β一巰基乙醇(BME)對(duì)大鼠胚胎脊髓神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的影響.方法：從大鼠胚胎脊髓中分離神經(jīng)干細(xì)胞，經(jīng)過(guò)2~3次傳代培養(yǎng)后，采用含10ml/L血清的不同濃度的BME分組對(duì)細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo)，選擇3個(gè)時(shí)段觀察細(xì)胞形態(tài)變化情況，誘導(dǎo)24h后采用GFAP和NSE免疫熒光染色法鑒定分化結(jié)果，同時(shí)對(duì)分化結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.結(jié)果：用BME(0.5mmol/L)組和對(duì)照組血清誘導(dǎo)的神經(jīng)元的

5、百分率分別為49%和10%，而B(niǎo)ME(1mmol/L)組的神經(jīng)元分化率顯著升高至58%.由BME(0.5mmol/L)組、BME(1mmol/L)組和對(duì)照組血清誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞分化率分別為46%，35%和83%.結(jié)論：BME有明顯誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向成熟神經(jīng)元分化的作用.配合血清使用可使細(xì)胞向神經(jīng)原分化的趨勢(shì)明顯優(yōu)于單純使用血清，兩者協(xié)同效應(yīng)明顯.　　【關(guān)鍵詞】β一巰基乙醇(BME)；神經(jīng)干細(xì)胞；細(xì)胞分化　　0引言　　β巰基乙醇(βmereaptoethanol,BME)又名2巰基乙醇，是具有硫醇臭味的無(wú)色或微黃色透明液體，作為一種

6、化學(xué)原料藥具有抗氧化作用.SCs)向神經(jīng)元方向分化的過(guò)程中起到關(guān)鍵作用,陳霞平等［2］對(duì)BME誘導(dǎo)MSCs作用也有相關(guān)報(bào)道.MSCs在被誘導(dǎo)分化為成熟神經(jīng)細(xì)胞的過(guò)程中必定經(jīng)過(guò)神經(jīng)干細(xì)胞階段.因此，本研究將成功誘導(dǎo)MSCs的BME配合血清作用于神經(jīng)干細(xì)胞，以觀察其對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖過(guò)程及分化結(jié)果的影響.　　1材料和方法　　1．1材料　　受孕SD大鼠(E10E12)由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；DMEM/F12,N2添加劑均購(gòu)自Gibco公司；EGF,bFGF購(gòu)自Sigma公司，兔抗鼠NSE,GFAP,NESTIN一抗以及羊抗兔FIT

7、C,CY3熒光二抗均購(gòu)自博士德公司；BME，多聚賴氨酸，胰蛋白酶均購(gòu)自Sigma公司.倒置相差光學(xué)顯微鏡OLYMPUSIX70型.　　1．2方法　　1．2．1NSC原代培養(yǎng)依照EM/F12為基本培養(yǎng)基，N2添加劑以1∶100稀釋?zhuān)珽GF,bFGF［5,6］終濃度為20μg/L.調(diào)整細(xì)胞密度約為9×105個(gè)/L后接種于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，置于37℃,50ml/LCO2孵箱中培養(yǎng).每隔2~3d更換新鮮培養(yǎng)液，5~6d傳代.　　1．2．2實(shí)驗(yàn)分組將蓋玻片放入24孔板，并用多聚賴氨酸包備37℃過(guò)夜，使用前用PBS沖洗干凈.將傳至第3代的神經(jīng)干細(xì)胞克

8、隆球用滴管吹打成單細(xì)胞懸液，僅使用基本培養(yǎng)基而不加入EGF，bFGF和N2，并稀釋至7.5×106個(gè)/L，接種到24孔板，每孔lmL細(xì)胞懸液.每6孔為一組，共分三個(gè)試驗(yàn)組(A~C組)和一個(gè)對(duì)照組(D組).A~C組分別使BME終濃度達(dá)到0.5,1和2