火針干預(yù)脊髓損傷大鼠后血清對神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響.pdf

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1、2013年1月第3O卷第1期天津中醫(yī)藥Jan．2013，Vo1．30No．1TianjinJournalofTraditionalChineseMedicineDOI：10．11656／j．issn．1672-1519．2013．O1．09十灸與推拿·火針干預(yù)脊髓損傷大鼠后血清對神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的影響李巖，周震，程素利3焦召華3陳爽(1．天津市公安醫(yī)院，天津300042；2．天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，天津300150；3．天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193)摘要：舊的】研究離體狀態(tài)下火針干預(yù)脊髓損傷大鼠后提取血清對神經(jīng)干細(xì)胞增殖分

2、化的影響。[方法】將15只SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組及火針組，相應(yīng)干預(yù)3d后取各組大鼠血清。從孕14天昆明小鼠胚胎脊髓組織中分離培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，同時采用上述各組血清進(jìn)行培養(yǎng)，7d后觀察各組神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化情況?！窘Y(jié)果】神經(jīng)干細(xì)胞在各組血清中均能存活、增殖并可向神經(jīng)元分化，火針組神經(jīng)干細(xì)胞增殖數(shù)目顯著多于假手術(shù)組及模型組，且火針組神經(jīng)元分化比例高于其余兩組(P

3、碼：A文章編號：1672—1519(2013)01—0025—03脊髓損傷(SCI)是交通事故、工礦事故及自然硬膜囊，撞擊能量為25mmxl0g，損傷直徑為2．5mm。災(zāi)害中常見的、嚴(yán)重危害人類健康的疾病，患者多與脊髓接觸的撞桿底端呈弧狀凹陷，直徑2．5mill，出現(xiàn)損傷平面以下的感覺、運動障礙及尿便功能異與脊髓表面相吻合。撞擊成功的標(biāo)志為大鼠尾巴痙?！尽?。目前，國內(nèi)外對于SCI的治療研究多集中在具攣性擺動，雙下肢及身體回縮樣撲動，雙下肢呈弛有自我更新和定向分化潛能的神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)緩性癱瘓。假手術(shù)組只做T9一TIO椎板切除

4、術(shù)。術(shù)后上[21。筆者在臨床應(yīng)用火針多年，發(fā)現(xiàn)其對慢性SCI小心護(hù)理飼養(yǎng)，每天擠壓排尿3次，直到反射性膀療效顯著。前期研究也發(fā)現(xiàn)，火針對于脊髓神經(jīng)細(xì)胱排空建立。胞具有保護(hù)和抗凋亡作用。但火針是否可能通過1．3干預(yù)方法火針組選取大鼠脊髓損傷部位上影響NSCs的增殖及分化產(chǎn)生作用尚不清楚。本課下端的棘突間隙，相當(dāng)于T7、T8及T11、T12部位，題應(yīng)用細(xì)胞離體培養(yǎng)和血清藥理學(xué)的方法，就火針各旁開0．5cm，共4個穴，8個針刺點，采用快針法干預(yù)SCI大鼠后血清對脊髓NSCs增殖分化的影響火針針刺，每穴僅刺1針，深度為3～5mm。造模后即進(jìn)

5、行相關(guān)研究。行針刺1次，之后每隔24h針刺1次，共治療3次。1材料與方法1．4目標(biāo)血清制備SD大鼠采血前禁食12h，于1．1實驗動物1)孕14d昆明小鼠2只，清潔級。第三次針刺后麻醉，無菌條件下腹主動脈取血，分離2)健康sD大鼠l5只，體質(zhì)量250～300g，由北京維血清。56℃滅活30rain，220Dm濾膜濾過除菌，-20℃通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，許可證號：保存?zhèn)溆?。SCXK(京)2007—0001，隨機分為假手術(shù)組、模型組1．5神經(jīng)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定取孕14d與火針組，每組5只。昆明小鼠，無菌取出胎鼠，經(jīng)D—Ha

6、nks液反復(fù)沖洗，1．2SCI模型動物建立采用改良的Allen’S法[61解剖鏡下剝離皮膚、肌肉等組織，眼科剪剪碎脊髓，建立急性SCI動物模型。即采用20g／L戊巴比妥鈉0．25％胰蛋白酶消化，吸管吹打，200目銅網(wǎng)過濾，離(40mg／kg體質(zhì)量)腹腔注射將大鼠麻醉，取后正中心，棄上清，加入含有DMEM／F12、2％的B27、20n兒切口，切除T9棘突、部分T10棘突和部分椎板，暴堿性成纖維生長因子(bFGF)、20ng／mL、表皮細(xì)胞露硬膜，10g的鐵錘從25mm高處自由落下，撞擊生長因子(EGF)、100U／mL青霉素、100t

7、~g／mL鏈霉素的生長培養(yǎng)基，以5xl0~'／mL密度接種入25cm2培作者簡介：李巖(1970一)，男，博士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師，長期從事火針、刺絡(luò)的臨床及實驗研究，現(xiàn)為中國針灸養(yǎng)瓶中，置人37oc、5％CO飽和濕度培養(yǎng)箱中培學(xué)會刺絡(luò)與拔罐專業(yè)委員會常委、天津針灸學(xué)會理事。養(yǎng)。此后每3d半量換液1次，每7d左右傳代1次。2013年1月第3O卷第1期天津中醫(yī)藥Jan．2013，Vo1．30No．1TianjinJoumalofTraditionalChineseMedicine27統(tǒng)計學(xué)意義，表明火針干預(yù)后的SCI大鼠血清可促

8、[5]李巖，程素利，周震，等．火針對大鼠脊髓損傷后運動功能及BDNF表達(dá)的影響2012，29(6)：545—547．進(jìn)NSCs增殖并可誘導(dǎo)其向神經(jīng)元分化，這為火針[6】KhanT，HaveyRM，SayersST，eta1．Anima