神經(jīng)生長因子對(duì)新生大鼠hibd后海馬區(qū)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

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1、神經(jīng)生長因子對(duì)新生大鼠HIBD后海馬區(qū)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響　　【Abstract】AIM:Toinvestigatetheeffectsofnervegropusofneonatalratsfolloicbraindamage(HIBD),anditsmolecularbiologicalmechanism.METHODS:Seventytlydividedintocontrolgroup,HIBDgroupandNGFgroup.TheratmodelsofHIBDodifiedRICEmethod.Immunohistochemistrya

2、ndTUNELstainingployedrespectivelytodetecttheexpressionsofBcl2andBaxandthenumberofapoptotichippocampalneurons.RESULTS:MoreorlessapoptoticneuronscouldbeobservedinhippocampusinHIBDgroupandthelevelofBcl2expressioninistration,thenumberofapoptoticneuronsarkably(P<0.01)asparedin

3、istrationofNGFmayincreaseBcl2expressionanddecreaseBaxexpressionafterHIBDinneonatalrats,thusinhibitingtheapoptosisinhippocampus.　　【Keyia,brain;braininjuries;hippocampus;apoptosisrelatedprotein　　【摘要】目的：應(yīng)用新生大鼠缺氧缺血性腦損傷（HIBD）模型，觀察神經(jīng)生長因子對(duì)海馬區(qū)細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白Bcl2和Bax的影響，探討其神經(jīng)保護(hù)作用的分子生物學(xué)機(jī)制.

4、方法：72只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、HIBD組和NGF治療組.應(yīng)用改良RICE法制作大鼠HIBD模型，TUNEL法檢測(cè)各組動(dòng)物海馬區(qū)細(xì)胞凋亡數(shù)，免疫組化染色觀察Bcl2,Bax蛋白的表達(dá).結(jié)果：與假手術(shù)組相比，新生大鼠HIBD后海馬區(qū)存在不同程度的細(xì)胞凋亡，Bcl2表達(dá)輕度升高，Bax表達(dá)明顯升高.與HIBD組比較，NGF治療后，凋亡細(xì)胞減少（P<0.01），Bcl2蛋白表達(dá)升高（P<0.01），Bax表達(dá)下降（P<0.01）.結(jié)論：HIBD后，新生大鼠海馬區(qū)細(xì)胞存在細(xì)胞凋亡，NGF治療增強(qiáng)Bcl2表達(dá)，減少損傷基因Bax表達(dá)

5、，抑制細(xì)胞凋亡，具有腦保護(hù)作用.　　【關(guān)鍵詞】神經(jīng)生長因子；缺氧缺血，腦；腦損傷；海馬；凋亡相關(guān)蛋白　　0引言　　缺氧缺血性腦損傷(hypoxicischemicbraindamage,HIBD)是由于宮內(nèi)窘迫、新生兒窒息等引起的新生兒腦部嚴(yán)重?fù)p傷，有較高的發(fā)病率和死亡率,也是導(dǎo)致智能落后和腦性癱瘓等兒童傷殘的主要原因［1］.HIBD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及多個(gè)環(huán)節(jié)，而凋亡是后期神經(jīng)細(xì)胞缺失和功能障礙的主要原因.細(xì)胞凋亡持續(xù)時(shí)間較長，適當(dāng)?shù)闹委熆赡孓D(zhuǎn)凋亡的病理過程而改善預(yù)后.本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用新生大鼠HIBD模型，以神經(jīng)生長因子(nervegroicencep

6、halopathy,HIE)提供理論依據(jù).　　1材料和方法　　1.1材料新生7d齡SD大鼠72只，雌雄不拘，體質(zhì)量11～16g，由第四軍醫(yī)大學(xué)醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供.注射用鼠神經(jīng)生長因子(NGF恩經(jīng)復(fù))（廈門北大之路生物工程公司）；兔抗大鼠Bcl2多克隆抗體，小鼠BaxmAb，免疫組化染色SP試劑盒，細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（武漢博士得生物工程公司）.　　1.2方法　　1.2.1動(dòng)物模型制備參照文獻(xiàn)［2］制作HIBD模型：大鼠乙醚麻醉后，游離左頸總動(dòng)脈并永久結(jié)扎，術(shù)后水浴箱恢復(fù)1h，再置于37℃自制缺氧艙中，以3L/min速度持續(xù)輸入含80ml/L氧氣的

7、氮氧混合氣體2h，制成HIBD模型.　　1.2.2動(dòng)物分組大鼠隨機(jī)分為3組：①對(duì)照組：24只（假手術(shù)處理，僅游離左頸總動(dòng)脈，不結(jié)扎亦不缺氧）；②HIBD組：24只，RICE法制備HIBD模型后腹腔注射生理鹽水，間隔24h，連用7d；③NGF組：24只，HIBD模型后即刻以NGF1000U/kg腹腔注射，間隔24h，連用7d.　　1.2.3腦組織病理學(xué)測(cè)評(píng)HIBD后6,24,72h和7d時(shí)間點(diǎn)取腦，參照?qǐng)D譜，取含海馬腦組織，行4μm連續(xù)冠狀切片.HE染色，光鏡下觀察海馬區(qū)細(xì)胞層結(jié)構(gòu)；取與HE相鄰切片，TUNEL染色，計(jì)數(shù)海馬區(qū)凋亡細(xì)胞數(shù)；每一標(biāo)本取2

8、張切片，每張切片取6個(gè)視野(CA1區(qū)3個(gè)視野，CA3區(qū)3個(gè)視野)，取兩張切片的均值作為該標(biāo)本結(jié)果，以該組6例樣本均值作為該