資源描述：
《芎嗪對(duì)高糖環(huán)境大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖及其細(xì)胞外基質(zhì)含量的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、芎嗪對(duì)高糖環(huán)境大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖及其細(xì)胞外基質(zhì)含量的影響【關(guān)鍵詞】糖尿病腎病川芎嗪細(xì)胞增殖細(xì)胞外基質(zhì)大鼠Abstract:Objective:Toexploretheeffectsoftetramethylpyrazineonproliferationofmesangialcellsandtheconcentrationofextracellularmatrixinhighglucoseculturedratmesangialcells.Methods:Ratmesangialcellsepo
2、ints,cellularsurvivalrateandproliferationentandCCK-8,Thesupernatantse-linkedimmunosorbentassay.Results:ThesurvivalratesofdifferentgroupsethylpyrazinecansignificantlyinhibitproliferationandsecretionofCollagentypeIVandFibronectininhighglucoseinducedratm
3、esangialcells.Keyethylpyrazine;cellularproliferation;extracellularmatrix;ratextracellularmatrix糖尿病腎?。╠iabeticnephropathy，DN）的主要病理改變是系膜細(xì)胞增殖及纖維連接蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）、Ⅳ型膠原(CollagentypeIV，ColIV)等細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix，ECM）成分增多。川芎嗪又名四甲基吡嗪(tetramethylpyraz
4、ine，TMP)，是從傘形科藁本屬植物川芎根莖中提取分離的生物堿單體，具有改善微循環(huán)、血液流變學(xué)，降血糖、抗氧化、抗纖維化和拮抗鈣離子等藥理作用，已廣泛應(yīng)用于心、腦、肺、腎及血管疾病的治療，大量臨床及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明TMP對(duì)DN有很好的療效。本研究觀察了TMP對(duì)高糖環(huán)境下大鼠腎小球系膜細(xì)胞（ratmesangialcells，MCs）增殖及FN、ColIV含量的影響，進(jìn)一步探討TMP對(duì)糖尿病腎病的保護(hù)作用及其可能機(jī)制。1材料和方法1.1材料大鼠腎小球系膜細(xì)胞株購自上海長征醫(yī)院；鹽酸川芎嗪粉劑購自山東長
5、富潔晶藥業(yè)有限公司；正常葡萄糖（含5.5mmol/LD-葡萄糖）及高糖（含25mmol/LD-葡萄糖）DMEM培養(yǎng)液購自美國Gibco公司；胎牛血清（FCS）購自天津正江高科技有限公司；CCK-8試劑購自上海同仁化學(xué)研究所；FN及IV型膠原ELISA試劑盒購自美國ADL公司；酶標(biāo)儀(BIO-TEKFL-800美國產(chǎn)品)；細(xì)胞分析儀/CASY細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（德國CASY公司產(chǎn)品）。1.2方法1.2.1以CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活力：取對(duì)數(shù)生長期MCs細(xì)胞，以2000個(gè)/孔鋪于96孔板，待MCs細(xì)胞貼壁后
6、，吸去原有DMEM培養(yǎng)液，換為1%FCS培養(yǎng)液,培養(yǎng)24h使所有細(xì)胞的生長同步化。隨機(jī)分5組:①對(duì)照組（5.5mmol/LD-GluDMEM培養(yǎng)液）。②高糖組（25mmol/LD-GluDMEM培養(yǎng)液）。③TMP低劑量組（高糖培養(yǎng)液+200μg/mlTMP）。④TMP中劑量組（高糖培養(yǎng)液+500μg/mlTMP）。⑤TMP高劑量組（高糖培養(yǎng)液+1000μg/mlTMP）。每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔，分別作用12h、24h、48h，于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)結(jié)束前1h加入10μl/孔CCK-8，37℃、5%CO2條件下繼續(xù)培
7、養(yǎng)1h后檢測OD450。1.2.2檢測細(xì)胞存活率：按上述培養(yǎng)、分組和作用方法，用9.9ml緩沖液，0.1ml細(xì)胞懸液于CASY細(xì)胞計(jì)數(shù)/分析儀器上直接檢測細(xì)胞存活率。1.2.3檢測細(xì)胞上清中ColⅣ和FN含量：雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測細(xì)胞上清中ColⅣ和FN含量,按試劑盒說明書操作。每項(xiàng)指標(biāo)每組設(shè)6孔，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出相應(yīng)的含量，為排除細(xì)胞數(shù)目對(duì)上清中ColⅣ和FN含量的影響，對(duì)每孔細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行校正，按每孔細(xì)胞數(shù)為1×106個(gè)來校正所得數(shù)據(jù)。1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用SPS
8、S12.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用單因素方差分析，方差齊者組間比較用LSD-t檢驗(yàn)，方差不齊者用Tamhane'sT2檢驗(yàn)。2.3TMP對(duì)MCs分泌的FN及ColⅣ的影響與對(duì)照組比較，高糖組的12h、24h、48hFN及ColⅣ含量明顯增加(P<0.05)；與高糖組相比，12h、24hTMP的高劑量組與中劑量組及48hTMP各劑量組FN及ColⅣ含量均有降低(P<0.01或P<0.05)，但不能恢復(fù)至低糖對(duì)照組水平；與對(duì)照組相比，TMP不同劑量組FN及ColⅣ含量差異無顯著
