依諾沙星片血藥濃度的測(cè)定及在健康志愿者體內(nèi)的藥動(dòng)

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1、依諾沙星片血藥濃度的測(cè)定及在健康志愿者體內(nèi)的藥動(dòng)【摘要】目的:建立人血漿中依諾沙星濃度的高效液相色譜（HPLC）方法，研究口服單劑量依諾沙星片后健康志愿者體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)過(guò)程。方法:健康志愿者20名，單劑量口服依諾沙星片0.4g，分別于服藥后24h內(nèi)多點(diǎn)抽取靜脈血。以HPLC法測(cè)定血漿中依諾沙星的濃度。以DAS藥代動(dòng)力學(xué)程序計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，分析體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過(guò)程。結(jié)果:依諾沙星片在(0.05～6.0)mg·L-1范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(r=0.9999)，相對(duì)回收率均在85%～115%范圍內(nèi)，絕對(duì)回收率大于75%

2、；日內(nèi)和日間變異均小于15%。依諾沙星濃度主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為：Tmax為(1.350±0.580)h；Cmax為(3.029±0.671)mg·L-1；T1/2為(5.835±0.908)h；AUC(0-24)、AUC(0-inf)分別為(17.678±2.899)mg·h·L-1和（18.685±3.172）mg·h·L-1。結(jié)論:本方法靈敏度高，選擇性好，重現(xiàn)性佳，可準(zhǔn)確測(cè)定人血漿中依諾沙星的濃度，適合藥動(dòng)學(xué)研究，為臨床用藥提供指導(dǎo)依據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】依諾沙星高效液相色譜法藥代動(dòng)力學(xué)依諾沙星（Enoxacin

3、），化學(xué)名為1-乙基-6-氟-1，4-二氫-4-氧代-7-（1-哌嗪基）-1，8-萘啶-3-羧酸倍半水合物，為三氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥，能通過(guò)抑制細(xì)菌的DNA回旋酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶IV，抑制DNA的合成和復(fù)制而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。其具有廣譜抗菌作用，對(duì)大多數(shù)革蘭陽(yáng)性菌和革蘭陰性菌具有良好的抗菌活性，對(duì)沙眼衣原體、支原體、軍團(tuán)菌具良好的抗微生物作用，對(duì)結(jié)核桿菌和非典型分枝桿菌也有抗菌活性[1]。本實(shí)驗(yàn)旨在建立簡(jiǎn)單快捷的檢測(cè)方法，研究依諾沙星片在中國(guó)健康志愿者體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)，為臨床用藥提供參考依據(jù)。1材料和方法1.1藥品、試劑和

4、儀器依諾沙星片（規(guī)格：0.1g/片）、氟羅沙星由湖北百科亨迪藥業(yè)有限公司提供。依諾沙星對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。甲醇和乙腈為色譜純，由天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心提供。三氟乙酸為Sigma公司產(chǎn)品（064K3647）。70%高氯酸、冰乙酸為分析純，由天津市化學(xué)試劑三廠(chǎng)生產(chǎn)。實(shí)驗(yàn)用水為本實(shí)驗(yàn)室自制重蒸水。高效液相色譜儀為Agilent1100系列，包括G1322A在線(xiàn)脫氣機(jī)、G1311A四元泵、G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1316A溫控箱、G1315B二極管陣列檢測(cè)器和Agilent化學(xué)工作站（RevA.

5、10.02.[1757]）。其他儀器包括：電子分析天平（AB204-A，梅特勒-托利多上海儀器公司產(chǎn)品）、旋渦混合器（XK96-B，姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品）、重蒸水儀（1810-B型，江蘇金壇市科析儀器有限公司產(chǎn)品）、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（TGL-16G，上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng)產(chǎn)品）。1.2受試者選擇根據(jù)藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則[2]，選取20名健康男性志愿者，年齡21～24歲，體重55～77kg。受試者無(wú)煙酒嗜好，無(wú)神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史，血尿常規(guī)、肝腎功能及心電圖等檢查均

6、正常。受試前2周至整個(gè)試驗(yàn)期間禁煙、酒和禁服其他任何藥物。試驗(yàn)方案經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同意書(shū)。1.3給藥方法和樣品采集20名受試者禁食12h后，于次日清晨空腹口服單劑量依諾沙星片0.4g，200ml溫開(kāi)水送服，服藥2h后方可飲水，4h后進(jìn)統(tǒng)一餐。服藥前取空白血，服藥后分別于0.333、0.667、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24h取靜脈血3.0ml，注入肝素化的試管，離心（3000r·min-1×10min），取血漿，-65℃冰凍保存?zhèn)錅y(cè)。1.4血漿樣品處理及血藥濃度測(cè)定1.4

7、.1色譜條件：色譜柱：ZORBAXEclipseXDB-C18（4.6×150mm，5μm，Agilent，USA）；保護(hù)柱：XDB-C18保護(hù)柱（4.6×12.5mm，5μm，Agilent，USA）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%三氟乙酸-水（20：20：60，V/V/V）；流速：1.0ml·min-1；柱溫：40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：342nm。1.4.2血漿樣品的處理方法：準(zhǔn)確吸取待測(cè)血漿樣品0.5ml于1.5mlEP管中，加入100mg·L-1氟羅沙星內(nèi)標(biāo)應(yīng)用液50μl，再加入35%高氯酸40μl，旋渦振蕩10s后，

8、12000r·min-1，離心10min。取上清液300μl于自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品瓶中，設(shè)定20μl進(jìn)樣檢測(cè)。1.5血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備和定量下限1.5.1血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備：取8支1.5mlEP管，分別加入不同濃度不同體積的依諾沙星標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，再用空白血漿補(bǔ)充到體積為0.5ml，配成濃度相當(dāng)于0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00mg·L-1的血漿