高效液相色譜法測定人血漿中依諾沙星含量及藥動學(xué)研究

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1、從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果高效液相色譜法測定人血漿中依諾沙星含量及藥動學(xué)研究作者：孫亞欣丁艷萍何曉靜肇麗梅【摘要】目的建立測定人血漿中依諾沙星濃度的高效液相色譜方法。方法血漿樣品經(jīng)甲醇沉淀蛋白后，以乙腈∶/L檸檬酸緩沖液(15∶85，)為流動相，經(jīng)HypersilBDSC18(×150mm，5μm)色譜柱分離，345nm波長檢測。結(jié)果依諾沙星在～μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，低、中、高三個濃度的提取回收率為%～%，日內(nèi)、日間

2、相對標(biāo)準(zhǔn)差為%～%。結(jié)論本方法準(zhǔn)確、快速，可滿足臨床藥動學(xué)研究的要求?！娟P(guān)鍵詞】依諾沙星高效液相色譜法藥動學(xué)DeterminationofenoxacininhumanplasmabyABSTRACTObjectiveAnHPLCmethodwasestablishedfordeterminationofenoxacininhumanserum.MethodsSerumprotEinwasprecipitatedwithmethanol.TheanalysiswasconductedwithaHypersilBDSC1(×150mm,

3、μm)column,acetonitrile∶/Lcitricbuffer(15∶85,)asmobilephase,andthedetectingwavelenghwasat4nm.ResultsThelinearrangeenoxacinwas～μg/mlandtherecoverieswereintherange%～%atthreedifferentconcentrations.TheRSDofintraandinterdaywereintherange%～%.ConclusionThis課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二

4、年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實(shí)驗(yàn)條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙嫛谋緦W(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果methodissuitableforthepharmacokineticstudyofenoxacin.KEYWORDSEnoxacin;HPLC;Pharmacokinetics依諾沙星又名氟啶酸，是第三代喹諾酮類廣譜抗生素，通過作用于細(xì)菌DNA螺旋酶，抑制細(xì)菌DNA的合成和復(fù)制而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。臨床上用于敏感菌所致的急性呼吸系統(tǒng)

5、、泌尿系統(tǒng)、消化道及皮膚軟組織等感染的治療［1］。有關(guān)依諾沙星濃度測定的方法國內(nèi)、外都有報道，有采用LC/MS/MS法［2］、熒光法［3］、微生物法［4］、微透析法［5］，常用HPLC紫外檢測［6，7］。本文建立了測定血漿中依諾沙星的高效液相色譜法，該方法簡便，快捷，并研究了該藥的體內(nèi)藥動學(xué)行為，為臨床研究提供方法和依據(jù)。1儀器與試藥HP1100系列高效液相色譜儀(Agilent公司)，GL20GII高速冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。依諾沙星對照品(含量%，山東羅欣藥業(yè)股份有限公司提供)；依諾沙星片(山東新華制藥股份有限產(chǎn)品，

6、規(guī)格為每片200mg，批號)。甲硝唑?qū)φ掌?內(nèi)標(biāo)物，中國藥品生物制品檢定所)；乙腈、甲醇為色譜純；檸檬酸和三乙胺均為分析純?？瞻籽獫{由中國醫(yī)科大學(xué)附屬二院輸血科提供。方法與結(jié)果.1色譜條件課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出結(jié)果，碩士生能在一年內(nèi)作出結(jié)果，特別是對實(shí)驗(yàn)條件等要有恰當(dāng)?shù)墓烙?。從本學(xué)科出發(fā)，應(yīng)著重選對國民經(jīng)濟(jì)具有一定實(shí)用價值和理論意義的課題。課題具有先進(jìn)性，便于研究生提出新見解，特別是博士生必須有創(chuàng)新性的成果色譜柱為HypersilBDSC18柱(×150mm，5μm)；流動相為乙腈∶檸檬酸緩沖液(15∶85，)

7、(緩沖鹽為每1000ml溶液加三乙胺6ml調(diào)至)；流速/min；檢測波長345nm；柱溫30℃。.2血漿樣品處理取血漿樣品，于具塞塑料離心管中，補(bǔ)加50μl甲醇，加入內(nèi)標(biāo)(10μg/ml甲硝唑甲醇溶液)50μl，加甲醇渦旋混合1min，10000r/min離心10min，移取上清液于另一潔凈試管中，55℃氮?dú)獯蹈缮锨澹?00μl甲醇溶解殘?jiān)?，?0μl上清液進(jìn)樣，記錄色譜圖。.3標(biāo)準(zhǔn)曲線取空白血漿，依次加入濃度為、、、、、和μg/ml的依諾沙星標(biāo)準(zhǔn)系列的甲醇溶液50μl，配制相當(dāng)于、、、、、和μg/ml的血漿樣品，按“”項(xiàng)下的方法操作，

8、制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。以待測物濃度C為橫坐標(biāo)，待測物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比(Y)為縱坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，得直線回歸方程：Y=r=(n=3).4方法專屬性考察課題份量和難易程度要恰當(dāng)，博士生能在二年內(nèi)作出