高效液相法測(cè)定不同產(chǎn)地柴胡藥材中柴胡皂苷a、d的

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1、高效液相法測(cè)定不同產(chǎn)地柴胡藥材中柴胡皂苷a、d的【摘要】［目的］建立一個(gè)HPLC方法，對(duì)國(guó)內(nèi)13個(gè)不同產(chǎn)地柴胡樣品中的柴胡皂苷a、d進(jìn)行含量測(cè)定。［方法］色譜柱：YMCPackODSAC18(250×46mm，5μm)，流動(dòng)相乙腈－水（43∶57），檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm。［結(jié)果］柴胡皂苷a、d的線性回歸方程分別為Ya=1223×106X-22498×105(r=09999)、Yd=2093×106X-47862×105(r=09998)，平均加樣回收率分別為9813%、9799%。［結(jié)論］本研究建立的柴胡皂苷a、d含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便易行，結(jié)果準(zhǔn)確、

2、可靠，便于對(duì)柴胡藥材進(jìn)行質(zhì)量控制。【關(guān)鍵詞】柴胡柴胡皂苷a、dHPLCDeterminationofSaikosaponina，dofRadixBupleurifromDifferentAreasbyHPLCAbstract：［Objective］TodevelopamethodusingHPLCfordeterminationcontentofsaikosaponinaandsaikosaponindofRadixBupleurifromdifferentareas.［Method］Column：YMCPackODSAC18(250×46mm，5μm)，mob

3、ilephase:acetonitrile.［Results］Theregressioneguationsofsaikosaponinaandsaikosaponindethodissimplyandsuitabletocontrolquantitativeofradixbupleurum.Key；saikosaponina,d;HPLC柴胡為傘形科植物柴胡(BupleurumChinenseDC.)或狹葉柴胡(BupleurumscorzonerifoliumCPackODSAC18柱(250×46mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈－水（43∶57）；流速：12

4、mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm；柱溫為室溫。在此色譜條件下，柴胡藥材中柴胡皂苷a、d的保留時(shí)間為626min、1453min見色譜圖1。22對(duì)照品溶液的制備精密稱取柴胡皂苷a對(duì)照品521mg，柴胡皂苷d對(duì)照品620mg，置250mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得，避光冷藏，備用。23供試品溶液的制備精密稱取柴胡藥材粉末100g置錐形瓶中，加入100mL5%氨水甲醇溶液，稱重，70℃水浴加熱回流4h，放冷，補(bǔ)足減失重量，溶液轉(zhuǎn)移至離心管中，4000r/min離心10分鐘，取上清液25mL，水浴揮干，殘?jiān)舆m量甲醇溶解，并定容至5mL，

5、過(guò)045μm濾膜，避光冷藏，備用。24標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液2、4、6、8、10μL，以峰面積積分值對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸處理，得到回歸方程a：Y=1223×106X-22498×105(r=09999)表明柴胡皂苷a在（0416μg～208μg）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，d：Y=2093×106X-47862×105(r=09998)表明柴胡皂苷d在（0496μg～248μg）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。圖1對(duì)照品（A）和樣品（B）HPLC圖(略)Fig.1HPLCChromatogramsofreferencesubstance（A）andFruct

6、usAurantii（B）25精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液6μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果柴胡皂苷aRSD為256%，柴胡皂苷dRSD為263%，表明本法精密度良好。26穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別在0h、1h、3h、6h、12h、18h、24h、48h、72h各進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積，結(jié)果柴胡皂苷aRSD為111%，柴胡皂苷dRSD為095%，表明供試品溶液室溫下放置72h基本穩(wěn)定。27重復(fù)性試驗(yàn)按供試品溶液制備方法平行制備6份，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定相應(yīng)峰面積，測(cè)得柴胡皂苷a質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD為150%

7、；柴胡皂苷d質(zhì)量分?jǐn)?shù)RSD為172%，表明本法重復(fù)性良好。28加樣回收率試驗(yàn)：分別稱取13號(hào)柴胡藥材粗粉04g、05g、06g，各精密加入70、90、105ml對(duì)照品溶液，平行3份，按供試品溶液制備項(xiàng)下制備，并按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果柴胡皂苷a的平均回收率為9813％，RSD為231%（n＝9），柴胡皂苷d平均回收率為9799％，RSD為281%（n＝9）。29樣品的測(cè)定分別取不同產(chǎn)地的柴胡藥材，按供試品溶液制備方法制備，分別精密吸取10μL，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法計(jì)算樣品含量，結(jié)果見表1。色譜圖見圖1。表1不同產(chǎn)地柴胡藥