熊果酸對(duì)卵巢癌細(xì)胞黏附、運(yùn)動(dòng)和侵襲的影響

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1、熊果酸對(duì)卵巢癌細(xì)胞黏附、運(yùn)動(dòng)和侵襲的影響：于麗波王晶孫文洲馬寶璋【摘要】目的探討熊果酸(UA)對(duì)人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞HO8910黏附、運(yùn)動(dòng)和侵襲的影響。方法以不同濃度的UA處理高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞HO8910，采用MTT法及細(xì)胞黏附人工重組基底膜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)UA對(duì)HO8910細(xì)胞的細(xì)胞毒作用及黏附能力的影響;Transol/L增加到30μmol/L，與對(duì)照組比較，對(duì)細(xì)胞黏附抑制率增強(qiáng)(P<0.01)，能顯著降低HO8910運(yùn)動(dòng)能力和侵襲能力(P<0.01)。結(jié)論UA能抑制卵巢癌細(xì)胞HO8910黏附

2、、運(yùn)動(dòng)和侵襲能力?！娟P(guān)鍵詞】熊果酸;卵巢癌;侵襲　　熊果酸(UA)，屬于五環(huán)三萜類化合物，研究表明具有抗炎、護(hù)肝、降血脂等多種生物學(xué)活性。近年來研究發(fā)現(xiàn)UA具有多種抗腫瘤的作用〔1～3〕，但其是否通過抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移起抗腫瘤作用還未見報(bào)道，本研究旨在通過體外實(shí)驗(yàn)探討UA對(duì)卵巢腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響和機(jī)制?！　?材料與方法　　1.1材料人卵巢癌細(xì)胞株HO8910引自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院研究所;UA、二甲基亞砜(DMSO)購自Sigma公司;RPMI1640培養(yǎng)基、四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)、新生牛血清、

3、胰蛋白酶購自杭州四季青生物工程公司;Transega公司;Matrigel購自BectonDickinson公司?！　?.2實(shí)驗(yàn)方法　　1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞在含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的RPMI1640的培養(yǎng)液中，37℃、5%CO2孵箱中，細(xì)胞經(jīng)過消化傳代，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞待用?！　?.2.2增殖抑制實(shí)驗(yàn)取對(duì)數(shù)生長期的HO8910細(xì)胞，細(xì)胞以1×106/孔接種于96孔培養(yǎng)板中。將培養(yǎng)板放入37℃、5%CO2孵箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后取出培養(yǎng)板，加入不同濃度UA，使其濃度

4、分別為10、20、30、40、50μmol/L，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)平行;同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組。培養(yǎng)板放回孵箱繼續(xù)培養(yǎng)48h，取出培養(yǎng)板，每孔加入MTT，培養(yǎng)板再放回孵箱孵育4h。吸出上清液，加入200μl二甲基亞砜。用酶標(biāo)儀測(cè)570nm波長處每孔的吸光度(A)值。計(jì)算增殖抑制率。增殖抑制率(%)=(對(duì)照組A值一處理組A值)/對(duì)照組A值×100%?！　?.2.3細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)取96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加入無血清RPMI1640稀釋的Matrigel膠溶液25μl，37℃孵箱過夜，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗2次，室溫干燥

5、1h。每孔加入2%牛血清白蛋白(BSA)20μl，置37℃孵箱1h，PBS沖洗2次，室溫干燥1h。收集對(duì)數(shù)生長期的HO8910細(xì)胞，懸浮于含0.1%BSARPMI1640培養(yǎng)基中，終濃度為6×108/L。用不同濃度UA預(yù)處理細(xì)胞24h，使其終濃度分別為10、20、30μmol/L，每孔加入預(yù)處理細(xì)胞100μl，對(duì)照組加入等量的PBS，置孵箱內(nèi)1h，棄去未黏附的細(xì)胞，MTT法測(cè)570nm處測(cè)A值。每組設(shè)3個(gè)平行孔，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。按下式計(jì)算細(xì)胞黏附抑制率。細(xì)胞黏附抑制率=(1-給藥組A值/對(duì)照組A值)×100

6、%。　　1.2.4細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)細(xì)胞侵襲重建基底膜實(shí)驗(yàn)在Transol/L，對(duì)照組加入等量的PBS。37℃，5%CO2溫箱培養(yǎng)24h。用棉簽擦盡膜的內(nèi)表面未穿過膜的細(xì)胞。隨機(jī)選擇5個(gè)400倍顯微視野，統(tǒng)計(jì)視野中侵襲至濾膜下表面的細(xì)胞數(shù)目，計(jì)算平均值。按下式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲的抑制率：抑制率=對(duì)照組平均侵襲細(xì)胞數(shù)-給藥組平均侵襲細(xì)胞數(shù)/對(duì)照組平均侵襲細(xì)胞數(shù)×100%?！　?.2UA對(duì)卵巢癌細(xì)胞株HO8910黏附能力的影響10，20，30μmol/LUA作用細(xì)胞24h時(shí)，HO8910黏附能力分別為0.389±

7、0.074，0.371±0.043和0.312±0.011，均顯著低于空白對(duì)照組(0.695±0.127)(P<0.01)，10，20，30μmol/LUA組表1UA對(duì)卵巢癌細(xì)胞株HO8910細(xì)胞的生長抑制作用(x±s)　　2.3UA對(duì)卵巢癌細(xì)胞株HO8910侵襲能力和運(yùn)動(dòng)能力的影響結(jié)果如表2，圖1所示，不同濃度的熊果酸在體外作用24h后可以顯著抑制HO8910細(xì)胞的侵襲和細(xì)胞體外趨化運(yùn)動(dòng)能力，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較具有顯著性差異(P<0.01)。表2UA對(duì)卵巢癌細(xì)胞株HO8910侵襲能力和趨

8、化運(yùn)動(dòng)能力的影響(x±s)　　3討論　　卵巢癌是女性三大惡性腫瘤之一，盡管采用了腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和多種化療方案，但其5年生存率依然無明顯改善。惡性腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移是引起腫瘤患者治療失敗和死亡的主要原因，腫瘤細(xì)胞首先通過膜表面受體黏附于由細(xì)胞間質(zhì)與基底膜組成細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)成分纖維黏連蛋白、層黏連蛋白和Ⅳ型膠原蛋白上，然后以蛋白酶降解基底膜和基質(zhì)，最后定向運(yùn)動(dòng)穿越ECM破損處，侵入局部血管、淋巴管，