人參總皂苷與三七總皂苷不同比例配伍對(duì)高糖刺激下腹

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1、人參總皂苷與三七總皂苷不同比例配伍對(duì)高糖刺激下腹【摘要】【目的】觀察益氣活血代表藥物人參、三七的提取物在不同比例配伍下對(duì)大鼠腹膜間皮細(xì)胞(PMCs)增殖的影響?！痉椒ā坎捎靡鹊鞍酌赶ǚ蛛x大鼠PMCs，建立穩(wěn)定的細(xì)胞培養(yǎng)模型，加入含425g/L葡萄糖的腹膜透析液作用3h后，再加入不同比例配伍的人參總皂苷和三七總皂苷，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測(cè)不同濃度的藥物及其配伍對(duì)大鼠PMCs增殖的影響。【結(jié)果】人參總皂苷和三七總皂苷終濃度為100μg/mL及80μg/mL均能對(duì)高糖透析液損傷后的PMCs的增殖產(chǎn)生保護(hù)作用(P<001);三七總皂苷與人參總皂苷在濃度比為1∶9以及4∶1時(shí)

2、能改善425g/L腹透液作用3h后對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生的增殖抑制(P<001)，且兩組的保護(hù)效能差異無(wú)顯著性意義(P>005)。【結(jié)論】具有益氣活血作用的人參與三七提取物在一定比例配伍后能夠?qū)Ω咛谴碳は碌拇笫驪MCs產(chǎn)生一定的保護(hù)作用?！娟P(guān)鍵詞】人參總皂苷/藥理學(xué);三七總皂苷/藥理學(xué);益氣活血;細(xì)胞增殖;腹膜間皮細(xì)胞/病理學(xué);細(xì)胞培養(yǎng);　腹膜透析　腹膜間皮細(xì)胞(PMCs)是構(gòu)成腹膜的主要細(xì)胞成分之一，具有重要的生理功能，它在保持腹膜結(jié)構(gòu)的完整性和功能的有效性中起重要作用[1]。然而以高滲透壓、低pH值、高葡萄糖濃度、乳酸鹽緩沖液為特點(diǎn)的乳酸鹽腹膜透析液(PDS)長(zhǎng)期大量使用對(duì)腹膜的結(jié)

3、構(gòu)和功能有損害[2]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)腹膜透析液能使PMCs出現(xiàn)細(xì)胞病理?yè)p害并呈現(xiàn)適應(yīng)性肥大衰老表型，電鏡下表現(xiàn)為細(xì)胞間緊密連接消失，PMCs活性降低、增殖能力下降，易于衰老脫落，出現(xiàn)腹膜超濾功能下降乃至超濾失敗[3-4]。近年來(lái)，益氣和活血類的中藥制劑如人參總皂苷、丹參酮等對(duì)PMCs影響的體外實(shí)驗(yàn)研究均有報(bào)道[5-6]，本研究以培養(yǎng)的大鼠PMCs為觀察對(duì)象，探討益氣活血代表藥物人參、三七的提取物人參總皂苷和三七總皂苷不同比例配伍對(duì)高糖刺激下PMCs增殖的影響。現(xiàn)報(bào)道如下?！　?材料與方法　　11動(dòng)物SPF級(jí)雄性SD大鼠，體質(zhì)量(150±20)g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：S

4、CXK(粵)20080020，質(zhì)量檢測(cè)單位：廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心?！　?2藥物、試劑及儀器425g/L葡萄糖的腹膜透析液為廣州百特醫(yī)療有限公司產(chǎn)品，人參總皂苷(ginsenosides，GS)為西安天一生物技術(shù)有限公司饋贈(zèng)，有效成分>950mg/kg，三七總皂苷(panaxnotoginsenosides，PNS)為黑龍江珍寶島制藥有限公司生產(chǎn)的血塞通注射用凍干粉，DMEM培養(yǎng)液、25g/L胰蛋白酶、四甲基偶氮唑鹽(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)均為Sigma公司產(chǎn)品?？勾笫蠹?xì)胞角蛋白(cytokeratin)抗原的單克隆抗體為博士德公司產(chǎn)品，SP試劑盒購(gòu)自廣州鼎國(guó)公司

5、。將100mgGS溶于10μLDMSO中，再用含體積分?jǐn)?shù)10%小牛血清的DMEMF12配制成濃度為200mg/mL藥液，超濾除菌，-20℃保存，PNS藥液的配制同GS。小牛血清為杭州四季青生物工程公司產(chǎn)品，超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備廠)，倒置相差顯微鏡(日本Nikon公司)，CO2恒溫培養(yǎng)箱(美國(guó)Harris公司)，Smartspec3000型酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(Biorad公司)?！　?3大鼠PMCs的培養(yǎng)與鑒定大鼠PMCs的培養(yǎng)按文獻(xiàn)[7]提供的方法操作，融合后間皮細(xì)胞呈鋪路石樣，傳代后用cytokeratin抗原的單克隆抗體采用免疫組化方法鑒定細(xì)胞。　　14細(xì)胞增殖試驗(yàn)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞

6、，接種于96孔培養(yǎng)板，細(xì)胞密度為1×105/mL，每孔100μL含體積分?jǐn)?shù)2%小牛血清的培養(yǎng)液同步培養(yǎng)24h，吸棄上清液，加入425g/L腹透液3h后小心吸棄腹透液，再加入不同體積的人參總皂苷與三七總皂苷，用完全培養(yǎng)液補(bǔ)足每孔終液體量為200μL，并根據(jù)工作濃度及每孔的液體總量換算成終濃度，每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。孵育6h后每孔加5g/LMTT20μL，繼續(xù)孵育4h后吸棄培養(yǎng)液，每孔加入DMSO溶液150μL，震蕩10min，用酶標(biāo)儀(波長(zhǎng)570nm)測(cè)定各孔吸光度(D)值。其中人參總皂苷及三七總皂苷的終濃度由低到高分別為5、10、20、40、60、80、100μg/mL。人參總皂苷與三七總皂苷的

7、配伍實(shí)驗(yàn)中設(shè)9個(gè)不同濃度給藥組。　　15統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS170統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間差異比較采用單因素方差分析，兩組間均數(shù)比較采用LSDt檢驗(yàn)，不滿足LSDt檢驗(yàn)條件者采用秩和檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平α=005?！　?結(jié)果　　21腹透液對(duì)PMCs細(xì)胞形態(tài)的影響圖1(彩圖見(jiàn)第438頁(yè))結(jié)果顯示：正常融合后的間皮細(xì)胞呈鋪路石樣，細(xì)胞間連接緊密，融合成片。經(jīng)425g/L腹透液處理3h后，倒置顯微鏡下