喉癌組織中核轉(zhuǎn)錄因子nfkb的定量檢測

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1、喉癌組織中核轉(zhuǎn)錄因子NFkB的定量檢測【摘要】探討核轉(zhuǎn)錄因子(nucleartranscriptionfactorkappaB,NFkB)的定量檢測在喉癌組織中的意義。方法：采用蛋白質(zhì)印跡雜交法（SA）法對20例喉癌組織和10例癌旁正常組織中NFkB的蛋白含量以及NFkBDNA結(jié)合活性進(jìn)行定量檢測，并進(jìn)行分析比較。結(jié)果：喉癌組織中NFkB的蛋白含量以及NFkBDNA結(jié)合活性均明顯高于癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：NFkB在喉癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能起一定的作用，并為喉癌的治療能提供一個新靶點(diǎn)

2、?！娟P(guān)鍵詞】喉腫瘤核轉(zhuǎn)錄因子蛋白質(zhì)印跡雜交凝膠電泳遷移率AAquantitativeanalysisofNFkBinlaryngealcarcinoma［ABSTRACT］Objective:ToexplorethesignificanceofthequantitativeanalysisofNFkBinlaryngealcarcinomatissues.Methods:ThequantitativeanalysisoftheprotEincontentandtheDNAbindingactivityofNFkBinedbyt

3、heSA)methodin20casesoflaryngealcarcinomatissuesand10casesofnormalpericarcinomatissues.Results:TheprotEIncontentandtheDNAbindingactivityofNFkBinlaryngealcarcinomatissuesanormaltissues（P<0.05）.Conclusion:TheNFkBmightplayanimportantroleintheoccurrenceanddevelopmentof

4、laryngealcarcinomaandoffersaneatreatment.［KEYSA)核轉(zhuǎn)錄因子（NFkB）廣泛存在于真核細(xì)胞中，通過調(diào)控眾多下游基因的轉(zhuǎn)錄來參與機(jī)體的免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和腫瘤形成過程。近年有很多研究報(bào)道NFkB在大腸癌、宮頸癌、肺癌、肝癌等組織中有較強(qiáng)的表達(dá)，而在喉癌組織中較少，且僅為免疫組化的定性分析。我們應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡雜交法（SA）法定量檢測了20例喉癌組織中NFkB的表達(dá)情況，現(xiàn)報(bào)道如下。1資料與方法1.1材料來源20例喉癌組織標(biāo)本均從2002年7月至2003年12月重慶醫(yī)科大學(xué)附屬

5、第一醫(yī)院第一次住院的喉癌患者中獲得，無放化療史，均為非轉(zhuǎn)移性；術(shù)前及術(shù)后病理檢查證實(shí)均為喉鱗狀細(xì)胞癌；所有標(biāo)本手術(shù)切除后3?min內(nèi)采集，同時(shí)術(shù)中切取10例癌旁組織作為喉正常組織作對照（實(shí)驗(yàn)前病理證實(shí)為正常組織），采集后將標(biāo)本置于-70?℃液氮保存?zhèn)溆谩?.2試劑NFkBP65抗體（一抗）和SA）法將上述提取的上清液，考馬斯亮藍(lán)G250測核蛋白濃度，并調(diào)整核蛋白濃度為1?μg/μl,置于-70?℃保存?zhèn)溆谩Ｓ肨4多核苷酸激酶和［r32p］ATP對寡核苷酸NFkB探針進(jìn)行末端標(biāo)記，與提取的核蛋白進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)。反應(yīng)液經(jīng)7%非解離

6、聚丙烯酰胺凝膠電泳，最后放射自顯影。用分析軟件以積分光密度值表示電泳區(qū)帶的結(jié)果。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)均用±s表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1SA法檢測NFkBDNA結(jié)合活性喉癌組織中有較強(qiáng)的DNA結(jié)合活性的NFkB條帶（圖2），其積分光密度值為10?962.91±2?938.44，而癌旁正常組織NFkBDNA結(jié)合活性積分光密度值為1?426.88±70.80，二者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=14.5，t0.05=2.1，P<0.05），即喉癌組織中NFkBDNA結(jié)合活性明顯高于癌旁正常組

7、織。3討論核轉(zhuǎn)錄因子NFkB是1986年Sen和Baltimore首先從成熟B淋巴細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的［1］，其命名是由于該細(xì)胞核的提取物中檢測到了一種能與免疫球蛋白k輕鏈基因增強(qiáng)子kB序列（GCGACTTTC）特異結(jié)合的核蛋白因子。它是由Rel蛋白家族中成員以同源或異源二聚體的形式組成的蛋白質(zhì)，其主要存在形式為P50和P65組成的二聚體［2，3］。NFkB屬DNA結(jié)合蛋白，具有結(jié)合某些基因啟動子kB序列并啟動靶基因轉(zhuǎn)錄的功能。靜息狀態(tài)下，NFkB二聚體在胞漿內(nèi)沒有活性，在細(xì)胞外信號（如白細(xì)胞介素1、腫瘤壞死因子、蛋白合成抑制劑、紫

8、外線等）的誘導(dǎo)刺激下，在NFkB轉(zhuǎn)錄通路的上游激酶的級聯(lián)作用下，NFkB核定位信號暴露，致使NFkB被激活并異位進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與靶基因的kB位點(diǎn)結(jié)合，啟動下游基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)?，F(xiàn)在的研究表明，NFkB是細(xì)胞分裂和生存的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因