大鼠海馬神經(jīng)元中μ阿片受體、cck受體的表達(dá)及慢性嗎啡作用對(duì)其表達(dá)的影響

《大鼠海馬神經(jīng)元中μ阿片受體、cck受體的表達(dá)及慢性嗎啡作用對(duì)其表達(dá)的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。

1、大鼠海馬神經(jīng)元中μ阿片受體、CCK受體的表達(dá)及慢性嗎啡作用對(duì)其表達(dá)的影響【摘要】目的:研究MOR1，CCKAR，CCKBR在海馬神經(jīng)元的分布和嗎啡對(duì)其受體的影響.方法：用激光共聚焦掃描技術(shù)，以神經(jīng)元特異性標(biāo)記抗體NF200對(duì)原代海馬神經(jīng)元進(jìn)行鑒定，采用特異性的MOR1，CCKAR，CCKBR的抗體觀察觀察它們?cè)诤ｑR神經(jīng)元上的表達(dá).選用雄性O(shè)R1，CCKAR及CCKBR；給予嗎啡后2~4d，MOR1在海馬神經(jīng)元上的表達(dá)較對(duì)照增高(P<0.05)，5d時(shí)，MOR1的表達(dá)顯

2、著下降(P<0.01)；隨嗎啡作用時(shí)間延長(zhǎng)，CCKAR和CCKBR在海馬神經(jīng)元的表達(dá)呈上調(diào)趨勢(shì)，且CCKBR的表達(dá)高于CCKAR(P<0.01).結(jié)論：海馬神經(jīng)元上同時(shí)存在MOR1，CCKAR和CCKBR，嗎啡作用時(shí)間越長(zhǎng)，MOR1表達(dá)越弱，而CCKAR和CCKBR表達(dá)越強(qiáng).【關(guān)鍵詞】阿片受體；CCKA受體；CCKB受體；嗎啡依賴(lài)；原代海馬神經(jīng)元；激光共聚焦；流式細(xì)胞術(shù)　　0引言　　研究表明μ受體（MOR1）是嗎啡等阿片類(lèi)物質(zhì)的主要作用位點(diǎn)，鎮(zhèn)痛活性最強(qiáng)，成癮

3、性也最強(qiáng)［1-2］.另有實(shí)驗(yàn)研究表明：在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛分布著一種典型的腦腸肽－膽囊收縮素(cholecystokininoctapeptide,CCK)，它是腦內(nèi)含量最高的一種神經(jīng)肽［3］，其通過(guò)CCK受體發(fā)揮生理作用.實(shí)驗(yàn)已證實(shí)：CCK受體拮抗劑不但能針對(duì)戒斷癥狀進(jìn)行對(duì)癥治療，而且有一定程度的防止復(fù)吸作用［4］，但具體機(jī)制尚未完全闡明.本研究采用不同的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，重點(diǎn)闡明MOR1,CCKAR及CCKBR是否存在于海馬神經(jīng)元上以及嗎啡在不同的時(shí)間點(diǎn)對(duì)3種受體的影響，為進(jìn)一步研究CCK受體拮

4、抗劑對(duì)嗎啡依賴(lài)大鼠戒斷癥狀的影響及其機(jī)制的研究奠定必要的基礎(chǔ).　　1材料和方法　　1.1材料　　健康雄性O(shè)R)，沈陽(yáng)第一制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)：遼寧藥準(zhǔn)字(1996)第002747號(hào).DMEM培養(yǎng)基、NeurobasalMedium，B27(美國(guó)Gibco公司)；山羊抗CCKA，山羊抗CCKB抗體，兔抗MOR1多克隆抗體，F(xiàn)ITCdonkeyantimouseIgG，BiotindonkeyantirabbitIgG(美國(guó)SantaCruz公司)；TRITCrabbitantigoa

5、tIgG，F(xiàn)ITCrabbitantigoatIgG，F(xiàn)ITCgoatantirabbitIgG(北京中山生物公司)；CY5antirabbitIgG(Camical公司)；小鼠抗NF200單克隆抗體(NEOMARKERS公司)；兔抗膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）多克隆抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；激光共聚焦顯微鏡(德國(guó)LEica)；EpicsXL流式細(xì)胞儀(美國(guó)BeckmanCoulter).　　1.2方法　　1.2.1原代大鼠海馬神經(jīng)元培養(yǎng)　　取出生1d的大鼠在無(wú)菌條件下

6、分離海馬組織，制備細(xì)胞懸液，用含B27Supplement的NBM進(jìn)行原代海馬神經(jīng)元培養(yǎng).　　1.2.2神經(jīng)元鑒定　　取培養(yǎng)6d的大鼠海馬神經(jīng)元，用免疫熒光標(biāo)記技術(shù)進(jìn)行鑒定，一抗分別為GFAP多克隆抗體和NF200單隆抗體，二抗分別為BiotindonkeyantirabbitIgG＋CY5antidonkeyIgG和FITCdonkeyantimouseIgG，標(biāo)記后選擇不同視野細(xì)胞進(jìn)行激光共聚焦掃描40ｘ（激發(fā)波長(zhǎng)488nm，發(fā)射波長(zhǎng)530nm）.　　1.2.3MOR1，CC

7、KAR，CCKBR在海馬神經(jīng)元的表達(dá)　　將原代海馬神經(jīng)元隨機(jī)分為NF200/MOR1，NF200/CCKAR，NF200/CCKBR3組，特異性抗體同上，用免疫熒光標(biāo)記和激光共聚焦掃描技術(shù)檢測(cè)受體的表達(dá).　　1.2.4MOR1，CCKAR，CCKBR在嗎啡處理大鼠海馬神經(jīng)元的表達(dá)　　1.2.4.1給藥與分組　　60只健康雄性1～M9組（分別給予MOR1~9d），大鼠參照　　2.2MOR1,CCKAR及CCKBR在海馬神經(jīng)元的表達(dá)　　在海馬神經(jīng)元膜，軸突和樹(shù)突上均有發(fā)藍(lán)色熒光的

8、MOR1陽(yáng)性表達(dá)產(chǎn)物（圖2A，D）；綠色熒光標(biāo)記物與紅色熒光標(biāo)記物重疊之后呈橙黃色熒光，CCKA,CCKB受體呈橙黃色標(biāo)記,在海馬神經(jīng)元膜表面廣泛分布（圖2B，C，E，F(xiàn)）.　　2.3嗎啡對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元MOR1,CCKAR,CCKBR表達(dá)的影響　　采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)給予嗎啡后MOR1，CCKAR，CCKBR在海馬神經(jīng)元上的表達(dá).給予嗎啡2d時(shí)MOR1上調(diào)(P<0.05)，5d時(shí)MOR1開(kāi)始出現(xiàn)下調(diào)，蛋白表達(dá)量顯著下降(P<0.01)，并呈時(shí)間依