橋本甲狀腺炎甲狀腺組織trail、caspase3的表達(dá)

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1、橋本甲狀腺炎甲狀腺組織TRAIL、Caspase3的表達(dá)【摘要】目的研究橋本甲狀腺炎（HT）患者甲狀腺組織中腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3（caspase3）的表達(dá)及其在HT發(fā)病和病理改變中的意義。方法采用SP免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)26例HT（HT組）和12例正常甲狀腺組織（對(duì)照組）中TRAIL、caspase3的表達(dá)情況。結(jié)果（1）TRAIL、caspase3在HT組呈高表達(dá)，多見(jiàn)于浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞旁的甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞；而浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞TRAIL染色陰性，caspase3染色呈弱陽(yáng)性。（2）

2、TRAIL的表達(dá)陽(yáng)性率在HT組明顯高于對(duì)照組(72.92%vs41.67%，P<0.05)，前者濾泡上皮細(xì)胞的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于后者[（0.051±0.016）vs（0.016±0.010），P<0.05]。(3)caspase3的表達(dá)陽(yáng)性率在HT組明顯高于對(duì)照組(92.31%vs33.33%，P<0.01)，濾泡上皮細(xì)胞的表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組[（0.065±0.025）vs（0.022±0.008），P<0.05]。(4)TRAIL與caspase3的表達(dá)程度呈正相關(guān)(rs=0.631，P=0.001)。結(jié)論

3、TRAIL與caspase3可能共同參與HT的病理演變過(guò)程，通過(guò)表達(dá)TRAIL激活caspase3而誘導(dǎo)甲狀腺濾泡細(xì)胞凋亡，損傷甲狀腺組織。【關(guān)鍵詞】腫瘤壞死因子胱氨酸天冬氨酸蛋白酶橋本甲狀腺炎（Hashimoto’sthyroiditis，HT）是器官特異性自身免疫性疾病，以免疫活性細(xì)胞浸潤(rùn)、甲狀腺特異性自身抗體和甲狀腺自身抗原特異性T淋巴細(xì)胞存在以及濾泡結(jié)構(gòu)的破壞為特征，是引起甲狀腺功能減退癥的最常見(jiàn)原因，其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。研究表明細(xì)胞凋亡在HT的發(fā)病機(jī)制中起重要作用[1]。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL，Apo2L)為腫瘤

4、壞死因子超家族（TNFRSF）的成員，是一個(gè)新近發(fā)現(xiàn)的與FasL同源的死亡配體，與死亡受體DR4、DR5結(jié)合誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3（caspase3）則是細(xì)胞凋亡重要的效應(yīng)分子，活化DNA酶，降解染色體，最終引起細(xì)胞凋亡。筆者通過(guò)免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)HT患者甲狀腺組織中TRAIL、caspase3的表達(dá)，探討TRAIL、caspase3在HT發(fā)病機(jī)制及病理改變中的意義。1對(duì)象與方法1.1對(duì)象選取20012005年手術(shù)切除并經(jīng)病理確診為HT的甲狀腺組織標(biāo)本26例（HT組），男性3例，女性23例，中位年齡44.5歲（

5、27～63歲）。選擇20042005年住院甲狀腺腺瘤患者腺瘤旁正常組織12例（對(duì)照組），男性1例,女性11例,中位年齡32歲（20～68歲）。2組患者術(shù)前均未接受藥物及同位素治療。1.2方法鼠抗人TRAIL單克隆抗體（美國(guó)RD公司）；鼠抗人caspase3單克隆抗體（美國(guó)LABVISION公司）；免疫組織化學(xué)試劑盒（深圳晶美生物工程有限公司）。采用SP免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)TRAIL、caspase3，操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。用已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照，同時(shí)用PBS替代第一抗體作陰性對(duì)照。1.3結(jié)果判斷與圖像分析陽(yáng)性染色細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色。根據(jù)細(xì)胞

6、質(zhì)的染色強(qiáng)度逐漸加深進(jìn)行評(píng)分，分為1,2,3分；根據(jù)著色細(xì)胞百分率進(jìn)行評(píng)分，分為1，2，3，4分。將每張切片染色強(qiáng)度得分與著色細(xì)胞百分率得分各自相乘為其最后得分：0分為陰性（－），1～2分為弱陽(yáng)性（＋），3～4分為中等陽(yáng)性（），≥6分為強(qiáng)陽(yáng)性（）。采用圖像分析系統(tǒng)（CMIASB型，北京航空航天大學(xué)圖像中心、空軍總醫(yī)院）測(cè)定陽(yáng)性甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的TRAIL、caspase3的平均光密度（D）值，即陽(yáng)性細(xì)胞質(zhì)單位面積內(nèi)TRAIL、caspase3的相對(duì)含量，單位為AU(arbitraryunits)。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)

7、計(jì)軟件包進(jìn)行分析。兩樣本率差別檢驗(yàn)用四格表Fisher確切概率法；所得定量資料采用t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)行t＇檢驗(yàn)；變量之間相關(guān)關(guān)系的比較，采用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)中的等級(jí)資料Spearman秩相關(guān)作數(shù)據(jù)分析。P＜0.05為界值。2結(jié)果2.1免疫組織化學(xué)染色2.1.1TRAIL染色HT組陽(yáng)性細(xì)胞分布不均勻，強(qiáng)陽(yáng)性細(xì)胞多集中在淋巴濾泡和生發(fā)中心附近的甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞，部分甲狀腺濾泡已萎縮、破壞，失去濾泡結(jié)構(gòu)，濾泡內(nèi)無(wú)膠質(zhì)；另一部分甲狀腺濾泡結(jié)構(gòu)完整，陽(yáng)性染色上皮細(xì)胞多為立方狀或低柱狀，HT中浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞TRAIL不染色。對(duì)照組中TRAIL僅見(jiàn)于少數(shù)甲狀腺濾泡上

8、皮細(xì)胞（圖1）。HT組與對(duì)照組TRAIL陽(yáng)性表達(dá)率比較見(jiàn)表1。A：對(duì)照組陽(yáng)性細(xì)胞僅見(jiàn)于少數(shù)甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞;B：橋本甲狀腺炎組陽(yáng)性細(xì)胞