芩連滴丸提取工藝的優(yōu)化

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1、芩連滴丸提取工藝的優(yōu)化【摘要】目的優(yōu)化芩連滴丸的最佳提取工藝。方法采用正交實驗設計方法，以黃芩苷含量為評價指標，采用高效液相色譜法測定提取物中黃芩苷含量，對提取工藝中的提取方法和溶媒種類進行優(yōu)化。結(jié)果最佳提取工藝為在藥材中加入12倍量60%乙醇浸泡60min，回流提取2次，每次60min。結(jié)論該滴丸的提取工藝簡便、合理可行。【關(guān)鍵詞】芩連滴丸正交設計提取工藝黃芩苷高效液相色譜芩連滴丸處方源于《中國藥典》2005年版Ⅰ部芩連片。處方組成為黃芩213g，連翹213g，黃連85g，黃柏340g，赤芍213g，甘草85g，具有清熱解毒，消

2、腫止痛之功效。主治臟腑蘊熱，頭痛目赤，口鼻生瘡，熱痢腹痛，濕熱帶下，瘡癤腫痛等癥［1］。滴丸是固體分散體，藥物在滴丸中高度分散，與片劑服用量大，崩解度差，藥物奏效緩慢相比，具有表面積大，溶出速率快，生物利用度高等特點。本實驗采用正交實驗設計，以黃芩中的主要有效成分黃芩苷含量作為評價指標，優(yōu)化芩連滴丸的提取工藝，為開發(fā)出溶出速率快，生物利用度高的新型制劑提供依據(jù)。　　1儀器與材料　　Agilent1100高效液相色譜儀、DAD檢測器、四元泵、Agilent1100工作站；Bp211D電子分析天平（德國，sartorius）；RE-5

3、2AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；DZF-6050真空干燥箱（上海博迅實業(yè)有限公司）。黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110715-200514）；中藥材（天津市中藥飲片廠）；95%食用乙醇（天津市津酒集團）；甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純?！　?方法與結(jié)果　　2.1正交實驗設計選用L9(34)正交表進行實驗，以黃芩苷含量為評價指標，采用高效液相色譜法測定提取物中黃芩苷含量。所確定的因素水平（擬水平）見表1?！　”?因素水平（略）　　2.2黃芩苷含量測定方法　　2.2.1色譜條件［1］色譜柱：依利特C18(4.

4、6mm×200mm,5μm)；流動相：甲醇-水-冰醋酸(50∶50∶1)；流速：1.0ml·min-1;柱溫：30℃；檢測波長：277nm?！　?.2.2線性關(guān)系精密稱取黃芩苷對照品9.80mg置25ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述對照品溶液0.2，0.4，0.8，1.6，2.4，3.2ml，分別加入到5ml容量瓶中，用甲醇稀釋定容。按上述色譜條件，分別精密吸取10μl進樣，測定峰面積積分值（見圖1）。以對照品溶液濃度X（mg·ml-1）為橫坐標，峰面積積分值Y為縱坐標，建立回歸方程為：Y＝31281X

5、－165.66(r＝0.9993)，線性范圍為0.016～0.251mg·ml-1?！　D1黃芩苷對照品HPLC圖譜（略）　　2.3實驗方法及結(jié)果稱取黃芩、連翹、黃柏、赤芍、黃連和甘草，混合后用溶媒浸泡60min，然后按設計方案進行提取。提取液過濾，回收乙醇，減壓濃縮，真空干燥至干膏，粉碎成細粉。精密稱取提取物細粉適量置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，用0.45μｍ微孔濾膜過濾制備成提取物測定液。精密吸取各提取物測定液10μl，按上述色譜條件依次進樣，測得黃芩苷峰面積積分值（見圖2），并計算出各提取物中黃芩苷的含量。見表2。

6、　　2.4結(jié)果分析　　2.4.1極差分析由表2中的R值可知，提取方法是影響黃芩苷含量的主要因素，溶媒種類、提取次數(shù)和溶媒用量次之?！　?.4.2方差分析采用SAS統(tǒng)計軟件對正交實驗結(jié)果進行方差分析（見表3），結(jié)果，因素A對提取物中黃芩苷含量的影響有顯著性。結(jié)合表2中的數(shù)據(jù)及根據(jù)低耗高效的原則，確定芩連滴丸最佳提取工藝條件為A2B2C3D3，即采用回流提取方法，加入12倍量60%乙醇浸泡60min，回流提取2次，60min/次?！　D2提取物HPLC圖譜（略）　　表2實驗結(jié)果（略）　　表3黃芩苷含量方差分析（略）　　3討論　　在進行

7、提取工藝條件考察時，采用了60%，30%乙醇和水作為溶媒進行提取。結(jié)果表明，3種溶媒的提取結(jié)果無顯著性差異?？紤]到用水和30%乙醇提取后提取液中含雜質(zhì)較多，需再用乙醇進行醇沉除雜，而用60%乙醇作溶媒進行提取，提取液經(jīng)過濾、回收乙醇后再濃縮即可。與水提比較，方便、快速，故本實驗采用60%乙醇作為提取溶媒。另外，提取液在回收乙醇后黃芩苷產(chǎn)生水不溶性沉淀，為了避免黃芩苷成分的損失，未將經(jīng)回收乙醇后的提取液過濾（曾采用HPLC法同時測定了過濾后濾液和濾餅中的黃芩苷含量，發(fā)現(xiàn)濾餅中黃芩苷的含量也較高）。但是，可能會出現(xiàn)增加服藥量的問題，怎

8、樣在保持藥效的情況下，對提取液進行純化以降低服藥量有待作進一步的研究。　　參照《中國藥典》2005年版(Ⅰ部)黃芩中黃芩苷含量測定和芩連片中黃芩苷含量測定項下的方法，對不同流動相進行了實驗，如甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），甲醇-水-冰醋酸（