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《脈沖電磁場(chǎng)對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、脈沖電磁場(chǎng)對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的影響【摘要】目的：探討脈沖電磁場(chǎng)（PEMFs)對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（rMSCs）的影響.方法：用全骨髓貼壁法分離rMSCs，對(duì)其進(jìn)行1Hz和15Hz的PEMFs刺激，MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖水平，檢測(cè)堿性磷酸酶活性，進(jìn)行四環(huán)素?zé)晒馊旧外}結(jié)節(jié)染色.結(jié)果：rMSCs經(jīng)PEMFs刺激后，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖水平均有不同程度提高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中1Hz，0.4mT組改變最為明顯（3d，0.323±0.051；5d，0.714±0.058），對(duì)照組（3d，0.246±0.044；5d，0.487±
2、0.064），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；堿性磷酸酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組水平升高（5d，0.348±0.032；15d，2.339±0.034），對(duì)照組（5d，0.205±0.026；15d，0.533±0.013），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），四環(huán)素?zé)晒馊旧外}結(jié)節(jié)染色結(jié)果均呈陽性.結(jié)論：rMSCs經(jīng)PEMFs刺激后，能促進(jìn)體外培養(yǎng)rMSCs的增殖水平及成骨分化，磁場(chǎng)參數(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響.【關(guān)鍵詞】脈沖電磁場(chǎng)；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞；增殖；成骨細(xì)胞 0引言 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymalstemcells，MSCs）存在于骨髓基質(zhì)系
3、統(tǒng)中，具有自我更新能力和多向分化潛能，免疫原性弱［1-3］.脈沖電磁場(chǎng)（pulsedelectromagicfields，PEMFs)能夠促進(jìn)活細(xì)胞增殖及分化，刺激骨局部因子的產(chǎn)生，改善骨密度和生物力學(xué)特性［4］，用于骨折延遲愈合、骨不連、骨質(zhì)疏松癥等骨科疾?。?］.近年來，國內(nèi)學(xué)者在這方面開始了大量研究工作，認(rèn)為MSCs經(jīng)12Hz，1.1mT的PEMFs合理刺激后，細(xì)胞增殖加速，符合成骨細(xì)胞的形態(tài)特征和生物學(xué)特性［6］.利用恒磁場(chǎng)作用于骨組織中細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)恒磁場(chǎng)處理可以促進(jìn)MSCs向成骨方向分化［7］.本實(shí)驗(yàn)通過觀察rMSCs在低頻率PEMFs的作用下增殖水平
4、變化和細(xì)胞分化情況，以了解不同參數(shù)的PEMFs對(duì)rMSCs產(chǎn)生的影響. 1材料和方法 1.1材料 SD仔鼠，12～15d，體質(zhì)量30～35g，第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.骨愈合刺激儀（第四軍醫(yī)大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程系研制，ZL.0224739.4），治療頻率為15Hz和1Hz.低糖DMEM（美國Hyclone公司）；胎牛血清（天津?yàn)笊镏破房萍加邢挢?zé)任公司）；胰蛋白酶，茜素紅S（美國Sigma公司）；鹽酸四環(huán)素膠囊（西安利君制藥股份有限公司）；堿性磷酸酶試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司）. 1.2方法 1.2.1rMSC的體外分離培養(yǎng) 斷頸處死大
5、鼠，無菌條件下取其股骨和肱骨.在PBS中將骨剪成1～2mm3的小塊，100目篩網(wǎng)過濾后移入離心管中，1200rpm離心5min，棄上清，重懸浮于4mL低糖DMEM中.72h后換液. 1.2.2rMSCs生物學(xué)特性鑒定 進(jìn)行PAS過碘酸雪夫氏染色、油紅O染色和堿性磷酸酶（ALP）染色. 1.2.3rMSCs生長曲線的繪制 將原代細(xì)胞以5×106cells/孔接種在24孔板上，第4日開始，每日消化3個(gè)孔，分別計(jì)數(shù)，求平均值繪制生長曲線.將第3代細(xì)胞以1×104cells/孔接種在24孔板上，第2日開始以同上方法繪制生長曲線. 1.2.4刺激方法 P
6、EMFs發(fā)生儀頻率：15Hz，1Hz；磁感應(yīng)強(qiáng)度：0～0.8mT可調(diào)；線圈直徑：200mm.調(diào)整兩線圈距離至100mm.將線圈放置在孵箱中，刺激時(shí)將細(xì)胞放置在兩線圈中間位置.調(diào)整需要的強(qiáng)度和頻率，刺激結(jié)束后，將對(duì)照組放在同樣位置相同時(shí)間.刺激時(shí)間為每次3h，1次/d. 1.2.5MTT法檢測(cè) 細(xì)胞增殖將rMSCs以1×104cells/mL接種于7個(gè)96孔板中，每板接種32孔.刺激方式為：T0組(對(duì)照組)；T1組(15Hz，0.2mT)；T2組(15Hz，0.4mT)；T3組(15Hz，0.8mT)；T4組(1Hz，0.2mT)；T5組(1Hz，0.4mT
7、)；T6組(1Hz，0.8mT)，連續(xù)作用5d.接種第2日開始PEMFs作用.第3日每板選擇16孔，加MTT（5g/L）20μL，37℃孵育4h，棄上清，加入DMSO150μL，振蕩10min，測(cè)定490nm波長時(shí)各孔的吸光度A值.第5日對(duì)其余孔做同樣檢測(cè). 1.2.6ALP活性檢測(cè) 將rMSCs以每孔1×104cells/mL接種于6個(gè)24孔板中，每板接種8孔，分為2組，每組3個(gè)板.刺激方式為：T0組(對(duì)照組)，T1組(1Hz，0.4mT).接種第2日開始PEMFs刺激，連續(xù)刺激15d.第3日選兩個(gè)板，測(cè)定ALP活性.第5日和第15日各檢測(cè)2個(gè)板. 1
8、.2.7四環(huán)素?zé)晒鈽?biāo)記 將rMSCs
