高效液相色譜法測(cè)定清肝膠囊中龍膽苦苷的實(shí)驗(yàn)

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1、高效液相色譜法測(cè)定清肝膠囊中龍膽苦苷的實(shí)驗(yàn)【摘要】目的建立高效液相色譜法測(cè)定清肝膠囊中的龍膽苦苷方法以C18反相柱為色譜柱，甲醇水為流動(dòng)相。檢測(cè)波長(zhǎng)270nm，用乙酸乙酯和甲醇混合液作提取劑。結(jié)果平均回收率為98.38%。r=0.9995,線性關(guān)系良好。結(jié)論此方法靈敏、準(zhǔn)確，適用于龍膽苦苷的測(cè)定?！娟P(guān)鍵詞】高效液相色譜法清肝膠囊龍膽苦苷龍膽為龍膽科植物，其根及根莖含龍膽苦苷，龍膽苦苷具有清肝解毒、消食健胃的功效。用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定復(fù)方制劑中的龍膽苦苷，其操作步驟簡(jiǎn)便，樣品回收率高，重現(xiàn)性好，

2、結(jié)果可靠，現(xiàn)報(bào)道如下。1儀器與試藥1.1儀器　　紫外分光光度計(jì)（日本島津UV-260）；高效液相色譜儀（AG）；薄層層析點(diǎn)樣臺(tái)TLC-SP-1（西安市秦西機(jī)械廠）；離心機(jī)800型（江蘇醫(yī)用設(shè)備儀器廠）；微量進(jìn)樣器（上海醫(yī)用激光儀器廠）。1.2試藥　　中性氧化鋁（100～200目）（上海五四試劑廠）；硅膠GF254（青島海洋化工廠）；龍膽苦苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；乙酸乙脂、甲醇、氯仿均勻?yàn)榉治黾儯ㄉ虾Ｔ噭┮粡S）。2含量測(cè)定2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅膠為填充劑；甲醇水（3：7）為流

3、動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。理論板數(shù)按龍膽苦苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。取清肝膠囊樣品5份，精密稱量，分別加入一定量的龍膽苦苷對(duì)照品，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法分別測(cè)定含量，計(jì)算回收率。3.3精密度實(shí)驗(yàn)3.3.1樣品測(cè)定精密度實(shí)驗(yàn)取清肝膠囊樣品6份，每份5g，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法試驗(yàn)，分別測(cè)定含量。3.3.2薄層層析精密度試驗(yàn)取清肝膠囊樣品5g，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法試驗(yàn)，在6塊薄層板上點(diǎn)樣［２］，每塊板上點(diǎn)2個(gè)點(diǎn)，測(cè)定含量。3.4紫外光譜試驗(yàn)　　取清肝膠囊與空白龍膽制劑各5g，分別照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法制備供試品溶

4、液，照分光光度法試驗(yàn)，在200～350nm間進(jìn)行重疊掃描。結(jié)果表明，在270nm處，制劑中其它原料幾乎不影響龍膽苦苷的測(cè)定。3.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備　　取龍膽苦苷對(duì)照品約400mg，照含量測(cè)定項(xiàng)下的方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為Conc=17﹒856A-0.0275，r=0.9995，曲線通過原點(diǎn)，線性相關(guān)較好。4討論　　采用高效液相色譜法測(cè)定清肝膠囊中的龍膽苦苷的含量，樣品的預(yù)處理是關(guān)鍵。在工藝上采用連續(xù)回流提取方法提取龍膽苦苷［３］，至提取液近無色時(shí)，可提盡龍膽苦苷。其殘?jiān)?jīng)薄層層析檢驗(yàn)，無龍膽苦苷斑點(diǎn)。提

5、取液濃縮后加入水，龍膽苦苷轉(zhuǎn)溶于水中，過濾，可除去提取中帶來的脂溶性雜質(zhì)；水溶液經(jīng)氧化鋁層析柱，甲醇洗脫，大部分色素等雜質(zhì)被吸附［４］，而龍膽苦苷被洗脫下來。柱層析洗脫過程中，采用100ml甲醇洗脫，龍膽苦苷幾乎全部洗下來。（fw.nseac.）　　采用薄層層析方法，用硅膠GF254板分離，熒光熄滅法定位，龍膽苦苷斑點(diǎn)清晰，有利于刮板?！　⊥ㄟ^試驗(yàn)證實(shí)，采用高效液相色譜法測(cè)定清肝膠囊中的龍膽苦苷，方法準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可靠。