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《高效液相色譜法測定炎熱清膠囊中梔子苷和黃芩苷的含量課件.ppt》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、高效液相色譜法測定炎熱清膠囊中梔子苷和黃芩苷的含量檢測波長的選擇通過紫外的全掃描可以看出梔子苷在240nm左右有最大的紫外吸收，該波長與國家藥典中梔子藥材“含量測定”項下規(guī)定的檢測波長238nm[2]相接近,且樣品中梔子苷的含量較少，在250nm以后的高波長紫外吸收很小；黃芩苷在278nm處有最大的吸收?？紤]梔子苷的最大吸收波長240nm為含量測定波長，以提高梔子苷的靈敏度，且黃芩苷在此波長下也能準確的定量提取溶劑的選擇根據(jù)黃芩苷或梔子苷的化學(xué)性質(zhì),實驗中先以甲醇,70%乙醇和無水乙醇為溶媒,以黃芩苷或梔子苷的提取量為指標進行考察。結(jié)果均以甲醇的提取效率最優(yōu),故選用甲醇作為提取溶劑。提取
2、方法的選擇常用的黃芩苷提取方法有回流法與超聲波提取法[3,4].據(jù)有關(guān)研究稱[5],超聲提取法要優(yōu)于回流法，故本實驗采用超聲提取法來對樣品進行提取，并對提取時間進行了考察。實驗中比較了20分鐘，30分鐘，40分鐘，50分鐘，60分鐘超聲提取法，分別進樣比較發(fā)現(xiàn)30分鐘，40分鐘，50分鐘提取出的梔子苷和黃芩苷的量大致相同，60分鐘時增加不明顯，所以選擇30分作為提取時間，提高了工作效率流動相的選擇據(jù)有關(guān)資料顯示，同時檢測黃芩苷和梔子苷的常用流動相有：1.甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)[8];2.甲醇-0.1%三氟乙酸水溶液(25∶75)[9];3.乙腈-0.2%磷酸[7];4.磷酸
3、鹽緩沖液(pH2.8)-甲醇(60:40)[8].通過比較和實驗發(fā)現(xiàn)當(dāng)乙腈比例大時，保留時間短，分離效果差；而甲醇比例加大，雖分離效果較好，但保留時間過長。最終確定選用第三種方法中的流動相，并采用梯度洗脫程序。試驗中根據(jù)進樣后色譜圖的具體情況不斷調(diào)整流動相中乙腈和磷酸水溶液的配比,流動相的流速。經(jīng)反復(fù)比較,得到了正文所述的流動相條件。在此條件下,黃芩苷和梔子苷的分離效果及峰形最好儀器色譜儀：Agilent1200型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)包括色譜柱AgilentEclipseXDB－C18(150mm×4.6mm,5μm）、二極管陣列檢測器、溶劑傳輸泵，AB204-S分析
4、天平（上海精科天平），DFT-200克手提式高速中藥粉碎機（浙江溫嶺市林大機械有限公司）。超聲儀：DL-720D數(shù)控超聲波清洗器（上海文信儀器有限公司），微孔抽濾：AP-01PRACUUMPUMP(220V,50HZ)。色譜條件色譜柱：ZORBAXEclipseXDB-C18(4.6×150mm,5μm)；填充劑：十八烷基鍵合硅膠；流動相:(A)乙腈-(B)0.2%磷酸水溶液，具體梯度洗脫程序如下表1所示序號時間(min)A%(乙腈)B%(0.2%磷酸)流速(ml/min)100.00014860.429.00014860.4310.00025751.000檢測波長為240nm，柱溫為3
5、0℃，進樣量為4μl/針，在該色譜條件下黃芩苷的出峰時間約為9.9min，梔子苷的出峰時間約為16.0min，二者的峰都與共存的其他成分分離良好樣品溶液色譜圖min024681012141618mAU050100150200250A12梔子苷黃芩苷陰性對照（不含梔子）溶液色譜圖min024681012141618mAU020406080100120B2黃芩苷陰性對照（不含黃芩）溶液色譜圖min02.557.51012.51517.5mAU0255075100125150175C1梔子苷陰性對照（不含梔子和黃芩）溶液min024681012141618mAU0102030405060708
6、0D對照品溶液色譜圖min024681012141618mAU020406080100120140160E12梔子苷黃芩苷min024681012141618mAU020406080100120140160E12min024681012141618mAU01020304050607080Dmin02.557.51012.51517.5mAU0255075100125150175C1min024681012141618mAU020406080100120B2min024681012141618mAU050100150200250A12線性關(guān)系考察精密量取梔子苷、黃芩苷混合對照品溶液2、4、
7、6、8、10μl。按上述色譜條件進行測定，記錄峰面積，以峰面積積分值Y為縱坐標，進樣量X(μg)為橫坐標，繪制標準曲線(見表2及圖1)。結(jié)果表明梔子苷回歸方程為:y=1718.1818x+125.5999(r=0.9999),在0.22～1.10μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系;黃芩苷回歸方程為:y=1063.8235x—35.2001(r=0.9999),在0.68～3.40μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。線性關(guān)系圖梔子苷標準曲線圖0500
