高效液相色譜法測定熱咳喘膠囊中黃芩苷的含量

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1、高效液相色譜法測定熱咳喘膠囊中黃芩苷的含量　　熱咳喘膠囊為我院自制制劑品種，全方由黃芩、麻黃、天竺黃和地龍等17味中藥組成，具有清熱化痰、止咳平喘的作用，用于熱痰所致的咳嗽、咯痰、氣喘等癥；以及急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作見以上癥候者。原標(biāo)準(zhǔn)未建立含量測定方法，為增強(qiáng)制劑質(zhì)量的可控性，我們參照相關(guān)文獻(xiàn)［1］，用高效液相法測定黃芩中黃芩苷的含量，并對測定方法進(jìn)行了方法學(xué)考察，取得了滿意結(jié)果。　　1儀器與試藥　　高效液相色譜儀：LC10ATvp泵、SPD10Avp紫外檢測器、CTO10ASvp柱溫箱（日本島津）；ShimadzuLibrorAEL40SM(十萬分之一)天平（日本島津）；甲醇

2、（色譜純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；水（重蒸餾，臨用前制備）；磷酸（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；黃芩苷對照品（中檢所，批號(hào)：110715200212，供含量測定用）；熱咳喘膠囊樣品（自制，批號(hào)：051101，051102，051103）。其余試劑均為分析純?！　?方法與結(jié)果　　2.1色譜條件色譜柱：DiamonsilC18(5μm,250mm×4.6mm，迪馬)；流動(dòng)相∶甲醇∶水∶磷酸（47∶53∶0.2）；流速：1ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：280nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)應(yīng)不低于2500?！　?.2對照品及供試品溶液的制備　　2.2.1對照品溶液制備精密稱取在60℃減壓干燥4

3、h的黃芩苷對照品適量，加甲醇制成每毫升含45μg的溶液，即得。　　2.2.2供試品溶液制備取供試品內(nèi)容物約1g，精密稱定，精密加入70%乙醇100ml，稱定重量，超聲處理30min，取出，放冷，用70%乙醇溶液補(bǔ)足減失重量；精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，取續(xù)濾液，即得?！　?.2.3陰性溶液制備取除黃芩以外的其他藥材，按制備工藝制成缺黃芩陰性樣品。取黃芩陰性樣品，按2.2.2項(xiàng)下方法制備，即得?！　?.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別取黃芩苷對照品溶液、供試品溶液及缺黃芩的陰性對照溶液各10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。從色譜圖可知，在此色譜條件下

4、，樣品有與對照品黃芩苷相同保留時(shí)間的對應(yīng)峰，并與其他組分峰達(dá)完全分離，陰性對照無干擾?！　?.4線性關(guān)系考察精密稱取黃芩苷對照品適量，加甲醇稀釋制成0.04525mg/ml的黃芩苷對照品溶液，分別精密吸取黃芩苷對照品溶液5，10，15，25μl，注入液相色譜儀，測定峰面積積分值，測定結(jié)果見表1，并以對照品進(jìn)樣量X（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積值Y（mv.s）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=811224.3094X-47854.3，r=0.9998。結(jié)果表明，黃芩苷在0.22625～1.13125μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。　　表3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）　　2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精密稱取本品內(nèi)容物共5份

5、，照前述2.2.2項(xiàng)下的制備方法制備成供試品溶液，測定黃芩苷含量。結(jié)果表明本法重復(fù)性良好。結(jié)果見表4?！　?.8回收率實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法實(shí)驗(yàn)，精密稱取已知含量的同一批樣品（黃芩苷含量為18.5378mg/g）6份。各約0.5g，精密加入黃芩苷對照品適量，按2.2.2項(xiàng)下的方法制備成供試品溶液，測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表5?！　”?重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）　　表5加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（略）　　2.9樣品含量測定取熱咳喘膠囊3批，按2.2.2項(xiàng)下制備方法，分別制成供試品溶液，精密吸取供試品溶液10μl注入液相色譜儀，以標(biāo)準(zhǔn)對照法計(jì)算各樣品中的黃芩苷含量。結(jié)果見表6?！　”?樣品中黃芩苷的含量測定結(jié)果（略

6、）　　*為每粒中含量　　3討論　　本實(shí)驗(yàn)過程中，曾參照相關(guān)文獻(xiàn)［2,3］，選用甲醇0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液（pH3.0）(40∶60)；甲醇水（50∶50）為流動(dòng)相，結(jié)果黃芩苷峰分離均不如正文方法理想。供試品處理以回流提取、超聲提取進(jìn)行比較實(shí)驗(yàn)，結(jié)果回流提取效率和超聲提取效率相當(dāng)，由于超聲提取操作方法簡便，所以選擇超聲提取為樣品提取方法。供試樣品提取時(shí)間的考察中，對同一批樣品進(jìn)行不同提取時(shí)間（15，30，45，60min）考察，結(jié)果表明，供試樣品中的黃芩苷在30min以上含量變化已不大，說明黃芩苷基本提盡，故選30min為提取時(shí)間?！　⒖嘉墨I(xiàn)：　?。?］國家藥典委員會(huì).中國藥典，Ⅰ部

7、［S］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：211.　?。?］唐曉春，張綱，黃桂方，等.高效液相色譜法對甘露顆粒劑中黃芩甙含量的測定［J］.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998，18（1）：11.　?。?］劉福，吳功柱.HPLC法測定復(fù)方黃芩顆粒劑中黃芩苷的含量［J］.川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，15（2）：74.