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《雷帕霉素抑制血管緊張素ⅱ誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞增生》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、雷帕霉素抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞增生作者：尚明花范昱姚建董維平張政黃一新徐培楨【摘要】目的免疫抑制劑雷帕霉素對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）抑制作用機制。方法血管緊張素Ⅱ聯(lián)合不同濃度雷帕霉素刺激體外培養(yǎng)的HUVEC，3H-胸腺嘧啶核苷摻入法和3H-亮氨酸摻入法測定瞎胞DNA和蛋白質(zhì)合成，流式細胞術(shù)檢測細胞周期變化，免疫印跡（>P<0.01），雷帕霉素抑制p70S6K和CyclinD1的表達，阻滯細胞于G1期（P<0.01），而不影響ERK2，CyclinA、和CyclinB1的表達。結(jié)論PI3K-p70S6K信號通路在血管
2、緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的HUVEC增殖及細胞周期進程中起關(guān)鍵作用，p70S6K是免疫抑制劑雷帕霉素阻斷血管內(nèi)皮細胞增殖靶點?！娟P(guān)鍵詞】雷帕霉素血管緊張素Ⅱ信號傳導(dǎo)DNA合成血管內(nèi)皮細胞Rapamycininhibitstheproliferationofvascularendothelial【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinhibitionofrapamycininangiotensinⅡ-inducedvascularendothelialcellproliferation.MethodsCulturedHUVECulatedb
3、yAngⅡaloneorinbinationycin.Thecellproliferationeasuredby3H-thymidineincorporationand3H-leucinneincorporation.Cellcycleetry.Expressionofp70S6k，ERK2，cyclinA，cyclinB1andcyclinD1ycininhibitedAngⅡ-inducedincreaseinprotEincontentandDNAsynthesisycininhibitedtheexpressionofp70S6kandcyclinD1
4、ycintargetedp70S6kcouldhavegreatpotentialintherapeuticinterventionintheproliferationofvascularendothelialcells.【KeyycinangiotensinⅡsignaltransductionDNAsynthesisvascularendothelialcell血管緊張素Ⅱ不僅是一種肽類激素，具有多種生物學(xué)功能包括促進血管收縮，刺激醛固酮分泌和腎臟對鈉重吸收，而且，血管緊張素Ⅱ?qū)Τ衫w維細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞、血管平滑肌細胞和心肌細胞等多種細胞發(fā)揮生長因子的作
5、用［1，2］。它能誘導(dǎo)細胞增生導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)重構(gòu)，因此，阻斷血管緊張素Ⅱ的生物學(xué)效應(yīng)對預(yù)防潛在的病理生理事件的發(fā)生具有重要意義。雷帕霉素是一種強效免疫抑制劑和抗腫瘤藥物，它通過抑制哺乳類雷帕霉素靶分子（mTOR）抑制蛋白質(zhì)合成和使細胞阻滯于G1期。mTOR是核糖體的合成、蛋白質(zhì)的合成及細胞生長的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，它通過抑制p70S6激酶的活化和4EBP1磷酸化調(diào)控氨基酸和生長因子刺激的蛋白質(zhì)翻譯過程。近期的研究資料提示雷帕霉素在抑制血管內(nèi)皮細胞增生中發(fā)揮重要作用［3］，然而，雷帕霉素抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞增生信號傳導(dǎo)機制仍然不清。Ras-p42/p44M
6、APK及phosphatidylinositol3-kinase-p70S6kinase(PI3K-p70S6K)兩條信號傳導(dǎo)路徑在細胞增生方面都扮演重要的角色，為了闡明雷帕霉素對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞的影響，我們的實驗研究雷帕霉素和血管緊張素Ⅱ刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞后，細胞DNA和蛋白質(zhì)合成以及促進合成增加的主要信號蛋白ERK2、p70S6K和細胞周期蛋白的。1實驗方法1.1細胞培養(yǎng)本實驗采用體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞株HUVEC（ACTTNoCRL-1998）為研究對象，細胞生長于含10%新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中（GIBCO），含1%的青
7、-鏈霉素，在5％CO2，37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育，雷帕霉素溶于DMSO（SIGMA）終濃度分別為1ng/ml，10ng/ml，100ng/ml，細胞在無血清培養(yǎng)基孵育48h后，換無血清RPMI1640、AngⅡ10-6M、AngⅡ10-6M聯(lián)合不同濃度雷帕霉素（1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml）繼續(xù)孵育24h。1.2測定細胞的DNA和蛋白質(zhì)合成細胞接種于96孔板，不同濃度雷帕霉素（1ng/ml，10ng/ml，100ng/ml）刺激30min后，加含AngⅡ10-6M無血清培養(yǎng)基孵育24h，在收集細胞前12h，每孔加入1μCi/ml氚標(biāo)胸腺嘧啶核苷或氚
8、標(biāo)亮氨酸(3H-TdR，3H-亮氨酸，
