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《老年肺癌患者外周血單個核細(xì)胞htert基因表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、老年肺癌患者外周血單個核細(xì)胞hTERT基因表達【關(guān)鍵詞】肺腫瘤Expressionofhumantelomerasereversetranscriptasegeneinperipheralbloodmononuclearcellsoflungcancerinelderlypatients 【Abstract】AIM:Toinvestigatethesignificanceoftheexpressionlevelsofhumantelomerasereversetranscriptase(hTERT)geneinperipheralbloodmononucl
2、earcellsoflungcancerinelderlypatients.METHODS:TheexpressionlevelsofhTERTalelderlysubjectsbyquantitativemeasurementRNAinthelungcancerpatients(0.927±0.115)alsubjects(0.408±0.124,P<0.001),easurementRNAisaneffectivemethodinthediagnosisoflungcancerinpatientsinations. 【Keys;humantelo
3、merasereversetranscriptase;geneexpression 【摘要】目的：探討外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)的人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)基因的表達水平對于老年肺癌的診斷意義.方法：采用RTPCR定量檢測20例老年肺癌患者及10例正常老年人外周血單個核細(xì)胞的hTERT的基因表達水平.結(jié)果：老年肺癌患者hTERTmRNA的水平明顯高于正常對照組（0.927±0.115vs0.408±0.124,P<0.001）.與病理類型與臨床分期無相關(guān)性.結(jié)論：定量測定PBMCs的hTERTmRNA的表達水平是診斷不適合其他檢查的老年肺癌患
4、者的有效方法. 【關(guān)鍵詞】老年人；肺腫瘤；人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶；基因表達 0引言 老年疑似肺癌患者的明確診斷一直是長期困擾臨床醫(yī)生的實際問題.端粒酶可作為一種腫瘤標(biāo)記物已在多組研究中被證實.我們研究的目的是探討外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)的人端粒酶反轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)基因的表達水平對于老年肺癌的診斷意義. 1對象和方法 1.1對象 200201/200412我院住院的老年肺癌患者20例，男15例，女5例，年齡61~82（70±6）歲.患者依據(jù)病史、臨床表現(xiàn)、XRay胸片、肺CT，纖支鏡、癌細(xì)胞學(xué)及病理學(xué)確診（Tab1）.正常對照10例，均為來我院
5、健康體檢者，男7例，女3例，年齡62~81（71±5）歲，經(jīng)健康檢查均除外各種惡性腫瘤. 1.2方法 1.2.1標(biāo)本采集兩組人群于清晨06：0007：00空腹未起床活動時，平臥位采取右肘靜脈血3mL，肝素抗凝,加入等量的PBS液稀釋混均，加至5mL淋巴細(xì)胞分離液上，4℃離心（2000r/min,15min），吸取中間層單個核細(xì)胞，-80℃保存待檢測. 1.2.2總RNA提取上述細(xì)胞利用總RNA的提取系統(tǒng)(II)(totalRNAExtractionsystemII,華美生物工程公司)來提取總的RNA，實驗步驟按說明書進行.將沉淀的RNA進行干燥，用無R
6、Nase污染的水將RNA溶解，在A260280測吸光值，要求A260/280≥2.0并計算出RNA含量，并用其合成cDNA. 1.2.3引物構(gòu)建端粒酶hTERT引物從LterGenBank中調(diào)出hTERTmRNA全基因系列，采用primer5.0計算機軟件設(shè)計引物，上游引物5′TATGCCGTGGTCCAGAAGG3′,下游引物5′GCGTGGGTGAGGTGAGGTCT3′,擴增長度為328bp.內(nèi)參照(βactin)上游引物為5′GATTGCCTCAGGACATTTCTG3′,下游引物5′GCGTGGGTGAGTGAGGTCT3′,擴增片段長度為690
7、bp,引物由北京奧科合成. 1.2.4cDNA合成應(yīng)用RTPCR試劑盒（大連寶生物有限公司）逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA.每個反應(yīng)體系中加入總RNA1μL,2×buffer5μL,MgSO42μL,dNTPs0.5μL,AMV(逆轉(zhuǎn)酶)0.5μL,oligodT150.5μL,RNasEinhibitor0.25μL,dd.H2O0.25μL.將上述反應(yīng)物放入PCR儀(BIOMETRA型)65℃1min→30℃5min,30℃至65℃15→30min勻速升溫，65℃30min→98℃5min→5℃5min，合成好的cDNA存于-20℃?zhèn)溆?1.2.5內(nèi)參照定量PCR
8、在PCR反應(yīng)體積中，吸取cDNA1μL;dd.H2O
