復(fù)發(fā)的視神經(jīng)脊髓炎患者外周血單個核細(xì)胞bcl-2基因的表達(dá)

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1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文復(fù)發(fā)的視神經(jīng)脊髓炎患者外周血單個核細(xì)胞Bcl-2基因的表達(dá)姓名：郭筱菲申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：周廣喜20090501天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的1．探討視神經(jīng)脊髓炎(Ne嘲nvditisoptica，NMO)患者外周血單個核細(xì)胞(peripheralbloodmonocxwyoncell，PBMC)Bel-2基因的表達(dá)水平與此疾病復(fù)發(fā)之間的相關(guān)性；2．進(jìn)一步探討視神經(jīng)脊髓炎患者復(fù)發(fā)的時限與患者外周血單個核細(xì)胞Bc]02基因表達(dá)水平之間的相關(guān)性。方法1．選擇確診的視神經(jīng)脊髓炎患者25例，分為復(fù)發(fā)組及未復(fù)發(fā)組。其中復(fù)發(fā)組14例，未復(fù)發(fā)組11例。2

2、．分別取復(fù)發(fā)組和未復(fù)發(fā)組患者的新鮮外周靜脈血5ml，應(yīng)用FicOll密度．梯度離心法分離其外周血單個核細(xì)胞。3．以分離后的外周血單個核細(xì)胞為材料，應(yīng)用TRIzol法提取細(xì)胞內(nèi)的mRNA。4．以提取的mRNA為模板，應(yīng)用兩步法反轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription·PCR，RT-PCR)技術(shù)，首先將mRNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，繼而以cDNA為模板，以Bcl-2為目的基因及GAPDH為內(nèi)參對照，分別經(jīng)其引物擴(kuò)增。5．?dāng)U增后產(chǎn)物經(jīng)嗅化乙啶(Ethidiumbromide，EB)染色，1％瓊脂糖凝膠電泳后觀察，應(yīng)用凝膠成像分析儀攝片。6．以同一樣本Bd．2基因與GAPDH基因的

3、灰度比作為統(tǒng)計數(shù)據(jù)，主要應(yīng)用QUANTITYONE軟件處理試驗圖片得出數(shù)據(jù)，經(jīng)GENETOOLS軟件驗證性處理圖片得出數(shù)據(jù)，并選擇適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法，應(yīng)用SPSS軟件對所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。爭士里：口木1．復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組患者的一般資料比較，其年齡差異(t--o．216，P>0．05)、性別差異(X2=0．365，P>0．05)、發(fā)病次數(shù)差異艫：o．275，P>0．05)均無統(tǒng)計學(xué)意義。2．復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組患者外周血單個核細(xì)胞Bd-2基因表達(dá)水平之間的差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義0=6．096，P6天組

4、別，各組間患者外周血單個核細(xì)胞Bcl．2基因表達(dá)水平之間的差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(F=70．880，P6天組)的患者Bcl-2基因表達(dá)水平之間的差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(均P0．05)；但與邳天組相比則差距有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(忙5．085，Po．05)。5．分別應(yīng)用QUANTITYONE及GENETOOL

5、S軟件處理試驗圖片。處理后所得數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS軟件進(jìn)行分析后得到相同的統(tǒng)計學(xué)結(jié)果。以上所有結(jié)果以QUANTITYONE軟件處理的數(shù)據(jù)為例進(jìn)行說明。結(jié)論1．視神經(jīng)脊髓炎患者復(fù)發(fā)時可檢測到外周血單個核細(xì)胞Bcl-2基因較未復(fù)發(fā)患者表達(dá)增強(qiáng)，可以認(rèn)為視神經(jīng)脊髓炎的復(fù)發(fā)與患者外周血單個核細(xì)胞Bcl-2基因的表達(dá)水平具有相關(guān)性。2。視神經(jīng)脊髓炎患者復(fù)發(fā)時外周血單個核細(xì)胞Bcl-2基因表達(dá)增強(qiáng)的程度與發(fā)病時限存在相關(guān)性。其增強(qiáng)程度在發(fā)病初期更為明顯，隨著發(fā)病時間的延長而呈現(xiàn)逐漸減弱趨勢。關(guān)鍵詞：視神經(jīng)脊髓炎復(fù)發(fā)Bcl=2凋亡免疫RT-PCRⅡ天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractObjective1．T

6、oapproachtheexpressionofBcl-2geneinperipheralbloodmononuclearcdls(PBMC)ofpatients、以廿lNenromyelitisoptica(NMO)andthecorrelationbetweenBcl·2geneexpressionandrelapseofthedisease：2．Toapproachthecon'elationbctwcerltheexpressionofBcl一2geneandtherelapsingtime．Methods1．Tosek冠-t25OaSesofdefiniteNMOpatients，

7、anddividedinto2groups：14casesinrelapsedgroupand1casesatrestinremittinggroup．2．The5mlbloodsampleswereusedtoseparatePBMCbydensity-gradientcentrifugationmethodforallpatients．3．ItWasusedbyTRIzolmethodtoextractm