早期自然流產(chǎn)患者蛻膜組織中inos的表達(dá)及意義論文

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1、早期自然流產(chǎn)患者蛻膜組織中iNOS的表達(dá)及意義論文.freeleasuredbymeansofimmunohistochemicalmethod.Of41enrecruitedinthisstudy,20ensufferingfromearlyspontaneousabortion(abortiongroup)and21enundergoingelectiveterminationofnormallyprogressingpregnancies(controlgroup).ResultsPositivestainingofinduciblen

2、itricoxidesynthaseofstromalcells、glangepithelialandhuminalepitheliumofdeciduatissueongthem(P=0.026).ConclusionTheobviousincreaseiniNOSindeciduatissueayplayanimportantroleinthegenesisofspontaneousabortion.【Keyl,0.01M,pH:7.4,PBS90ml)固定24h以制備石蠟切片。石蠟包埋切片厚度為5um。切片常規(guī)脫蠟至水,用3%H2O

3、2。浸泡滅活內(nèi)源性酶,在滴加正常山羊血清封閉液前切片均需微波修復(fù)抗原,而后依次加入正常山羊血清封閉液、稀釋的一抗、二抗工作液、鏈酶親和素一過氧化物酶復(fù)合物,DAB(3,3-2氨基聯(lián)苯胺)顯色,封片。所有試驗(yàn)均采用在同一條件下進(jìn)行。結(jié)果判定,iNOS表達(dá)在細(xì)胞漿上,判定標(biāo)準(zhǔn)以細(xì)胞漿出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒為陽性,無著色或與背景顏色一致為陰性;隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野,根據(jù)多數(shù)細(xì)胞的染色強(qiáng)度計(jì)算強(qiáng)度得分,無著色為0分,淡棕黃色為1分,棕黃色為2分,深棕黃色為3分;陽性率和強(qiáng)度計(jì)分相加的結(jié)果:0~1分為(-),2分為(+),3~4分為(++),5~6分為(

4、+++)。1.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理全部統(tǒng)計(jì)學(xué)分析均采用SPSS14.0軟件包進(jìn)行,等級資料采用P使T細(xì)胞封閉于G0/Gl期,不能對IL-2R產(chǎn)生應(yīng)答,細(xì)胞免疫下降即TH1型反應(yīng)下降,從而使NO通過調(diào)節(jié)THl/TH2免疫平衡維持妊娠耐受。NO不僅是胎盤屏障的構(gòu)成基礎(chǔ),而且還可以通過免疫調(diào)節(jié)在妊娠免疫耐受中發(fā)揮重要作用。當(dāng)iNOS呈正常表達(dá)時(shí),NO的免疫活性在滋養(yǎng)細(xì)胞主要表現(xiàn)為免疫調(diào)節(jié)作用,維持妊娠免疫耐受。本研究結(jié)果顯示,大部分正常早孕組蛻膜組織的間質(zhì)細(xì)胞、腺上皮細(xì)胞及腔上皮細(xì)胞漿內(nèi)呈弱陽性染色,即iNOS為正常表達(dá)。NO又是一種活性很高的自由基,

5、其終產(chǎn)物過氧化亞硝酸根(ONOO-)有很強(qiáng)的毒性,能直接參與組織損傷,并介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。iNOS由巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞被炎性因子激活后產(chǎn)生,它可催化產(chǎn)生大量的NO參與某些生理效應(yīng)或病理生理過程。巨噬細(xì)胞來源的iNOS對構(gòu)成及維持胎盤屏障非常重要,在iNOS的參與下,小鼠著床期滋養(yǎng)細(xì)胞可產(chǎn)生NO,從而參與血管擴(kuò)張和血管形成,并介導(dǎo)吞噬受損傷的母體細(xì)胞的細(xì)胞毒作用,這些功能對胚胎的存活和發(fā)育具有重要意義。既往曾有研究7報(bào)道:早期自然流產(chǎn)患者絨毛組織中NO含量較正常早孕組絨毛組織中的含量減低,其作用機(jī)制可能是因?yàn)镹O有抑制子宮平滑肌收縮的作用,而NO

6、的減少可能使子宮收縮頻度較正常人增加,導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生,而其究竟是流產(chǎn)發(fā)生的原因還是流產(chǎn)引致的結(jié)果,尚無定論。但也有報(bào)道認(rèn)為,自然流產(chǎn)的發(fā)生與細(xì)胞凋亡有關(guān),而NO可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡8。有學(xué)者用RT-PCRDNA印跡證明胚胎未發(fā)現(xiàn)明顯病變前,蛻膜巨噬細(xì)胞iNOSmRNA的表達(dá)升高與流產(chǎn)有密切關(guān)系,即自然流產(chǎn)者在流產(chǎn)發(fā)生前著床部位已有巨噬細(xì)胞的入侵,侵入的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量的iNOS,使局部NO水平明顯增加,產(chǎn)生細(xì)胞毒作用,使細(xì)胞生長停止,導(dǎo)致細(xì)胞程序性死亡9。由于NO具有脂溶性特點(diǎn),可透過母胎屏障,對局部胚胎起殺滅作用10。本研究結(jié)果顯示,大部分早期自

7、然流產(chǎn)組蛻膜組織中,iNOS呈陽性、強(qiáng)陽性表達(dá),即iNOS表達(dá)異?；钴S,活性顯著增加。E)和左旋氧硝基精氨酸(LNA)則能有效避免自然流產(chǎn)的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示:正常早孕組與早期自然流產(chǎn)組iNOS在蛻膜組織中均有表達(dá),但表達(dá)有差異,早期自然流產(chǎn)組患者蛻膜組織中的iNOS的表達(dá)明顯高于正常早孕組。由此可見,iNOS在調(diào)節(jié)妊娠免疫時(shí)具有雙重性,當(dāng)其表達(dá)正常時(shí),主要表現(xiàn)為免疫調(diào)節(jié)功能,維持正常妊娠;而表達(dá)過高時(shí),發(fā)揮細(xì)胞毒作用,造成組織過度損傷,最終導(dǎo)致胚胎死亡而發(fā)生流產(chǎn)。如何利用NO對早期妊娠的調(diào)節(jié)作用,仍有待于更深入的研究。圖1正常早孕蛻膜組織

8、iNOS免疫組織化學(xué)法染色陽性表(放大倍數(shù)400×)圖2正常早孕蛻膜組織iNOS免疫組織化學(xué)法染色弱陽性表達(dá)(放大倍數(shù)400×)圖3自然流產(chǎn)蛻膜組織iNOS免疫組織