凋亡相關(guān)基因產(chǎn)物fas apo

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1、凋亡相關(guān)基因產(chǎn)物FasAPO　　我們采用免疫組織化學(xué)方法對(duì)35例腰椎間盤(pán)突出癥患者的退變腰椎間盤(pán)及11個(gè)(7例)正常腰椎間盤(pán)組織中FasAPO-1蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，探討其在腰椎間盤(pán)退變及突出癥發(fā)生、發(fā)展中的作用?！　∫?、材料與方法　　1.標(biāo)本來(lái)源：退變腰椎間盤(pán)組織(L1～5)取自本院骨科1998年5月～1999年1月間35例經(jīng)手術(shù)治療的腰椎間盤(pán)突出癥患者，其中男20例，女15例，年齡20～69歲，平均40.0歲。術(shù)中取纖維環(huán)及髓核組織各1塊，標(biāo)本經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為退變椎間盤(pán)。11個(gè)(7例)正常椎間盤(pán)組織(L1～5)做為對(duì)照，標(biāo)本取自新鮮尸檢，年齡22～59

2、歲，平均36.8歲。以上標(biāo)本離體后用福馬林固定48h，石蠟包埋，4μm厚切片，用于免疫組織化學(xué)染色?！　?.方法：檢測(cè)FasAPO-1蛋白表達(dá)所用一抗為親和純化的兔抗人FasAPO-1多克隆抗體(美國(guó)SantaCruz公司)，所有標(biāo)本均在同一條件下采用鏈菌素親生物素蛋白-過(guò)氧化酶連接法(LSAB)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，一抗稀釋度為1∶50。各步驟間均用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗片。FasAPO-1陽(yáng)性對(duì)照選用經(jīng)病理確診為淋巴瘤的石蠟切片，用PBS代替一抗為陰性對(duì)照?！　?.結(jié)果判斷：FasAPO-1蛋白表達(dá)以細(xì)胞膜及胞漿出現(xiàn)棕黃色染色為陽(yáng)性細(xì)胞，切片內(nèi)染色陽(yáng)

3、性細(xì)胞率小于20%為陰性顯色，大于20%為陽(yáng)性顯色，陽(yáng)性顯色者按細(xì)胞著色的強(qiáng)度和范圍分為＋、++、+++3個(gè)級(jí)別。每例切片雙盲法計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)最低不少于400個(gè)?！　?.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：資料分析采用χ2檢驗(yàn)?！　《⒔Y(jié)果　　腰椎間盤(pán)組織中FasAPO-1蛋白表達(dá)部位在軟骨樣細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)共檢測(cè)35例，其胞膜及胞漿出現(xiàn)棕黃色染色。其他組織細(xì)胞未見(jiàn)FasAPO-1蛋白表達(dá)。退變腰椎間盤(pán)組織FasAPO-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為85.71%，正常組陽(yáng)性率36.36%，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析2組間FasAPO-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率及表達(dá)強(qiáng)度差異均有顯著性(P＜0.05)。退變腰椎間盤(pán)纖維環(huán)組織F

4、asAPO-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為88.57%，髓核組織陽(yáng)性表達(dá)率為85.71%，差異無(wú)顯著性(P＞0.05)，表達(dá)強(qiáng)度差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。　　三、討論　　腰椎間盤(pán)退行性變是導(dǎo)致腰椎間盤(pán)突出癥的基本病因，退變腰椎間盤(pán)主要病理改變?yōu)樽甸g盤(pán)細(xì)胞數(shù)量減少及椎間盤(pán)基質(zhì)的降解［1］。成人腰椎間盤(pán)的細(xì)胞成分主要是軟骨樣細(xì)胞，它通過(guò)合成、分泌細(xì)胞外大分子基質(zhì)來(lái)維持椎間盤(pán)的正常生理功能。當(dāng)軟骨樣細(xì)胞死亡增加，其合成細(xì)胞外基質(zhì)的能力下降，不能有效地維持椎間盤(pán)基質(zhì)的膠體滲透壓，從而導(dǎo)致椎間盤(pán)脫水及退變。細(xì)胞死亡有兩種基本方式，即細(xì)胞壞死和細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，人類腰椎間盤(pán)

5、組織中存在凋亡的軟骨樣細(xì)胞［2］。Fas相對(duì)APO-1基因?yàn)榧?xì)胞凋亡基因的典型代表，F(xiàn)asAPO-1基因產(chǎn)物FasAPO-1蛋白是相對(duì)分子質(zhì)量為45×103的跨膜糖蛋白，屬神經(jīng)生長(zhǎng)因子與腫瘤壞死因子受體超家庭成員，是一個(gè)細(xì)胞凋亡信號(hào)受體，它與FasAPO-1抗體或配體(fasligand,FasL)結(jié)合后，其胞漿區(qū)經(jīng)特殊胞內(nèi)蛋白質(zhì)介導(dǎo)，直接激活凋亡基因產(chǎn)物，可以誘導(dǎo)FasAPO-1蛋白所在細(xì)胞的凋亡［3］，當(dāng)FasAPO-1系統(tǒng)的功能增強(qiáng)時(shí)，可導(dǎo)致組織細(xì)胞破壞的加劇。細(xì)胞膜表達(dá)有功能的FasAPO-1蛋白并且其表達(dá)量達(dá)到一定強(qiáng)度是通過(guò)FasAPO-1途徑誘

6、導(dǎo)凋亡作用的首要條件。有研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)asAPO-1蛋白在關(guān)節(jié)軟骨的軟骨細(xì)胞膜上表達(dá)，用抗FasAPO-1抗體作用于骨關(guān)節(jié)炎患者的軟骨細(xì)胞，可導(dǎo)致軟骨細(xì)胞凋亡，并認(rèn)為軟骨細(xì)胞凋亡是關(guān)節(jié)軟骨退變的主要病因［4］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腰椎間盤(pán)組織中FasAPO-1蛋白表達(dá)在軟骨樣細(xì)胞，F(xiàn)asAPO-1蛋白在退變腰椎間盤(pán)組織中表達(dá)率較高，表達(dá)較強(qiáng)，因此，組織細(xì)胞在FasAPO-1蛋白表達(dá)較高的情況下，可能進(jìn)行超常的凋亡，從而破壞了細(xì)胞增殖與凋亡的動(dòng)態(tài)平衡，這可能是腰椎間盤(pán)退變發(fā)生及進(jìn)展的原因之一?！　⒖?/p>