dpc4基因在肺癌中的表達及其與微血管形成和凋亡的關系論文

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1、DPC4基因在肺癌中的表達及其與微血管形成和凋亡的關系論文【摘要】目的探討DPC4(deletedinpancreaticcarcinomalocus4，DPC4)基因在非小細胞肺癌(nonsmallcelllungcarcinoma,NSCLC)中的表達及其與微血管形成和凋亡的關系。方法利用免疫組織化學SP法檢測52例NSCLC組織、19例相應的癌旁正常肺組織中DPC4、VEGF的表達，用CD34標記血管內皮細胞并計算微血管密度MVD值，應用TUNEL技術對細胞凋亡情況進行了檢測并計算凋亡指數(shù)。結果DPC4在肺癌原發(fā)灶中的陽性表達率為63.5%(33/52)，與癌旁正常肺組織中的

2、陽性表達率89.5%(17/19)相比，DPC4陽性表達水平顯著降低（P0.05）;DPC4與組織學類型、腫瘤細胞分化程度無關（P＞0.05），但與淋巴結轉移顯著相關（P0.05）。52例NSCLC中，DPC4的表達與VEGF、MVD值均呈負相關(r=-0.303,P=0.020)。DPC4陽性組凋亡指數(shù)(apoptoticindex,AI)值明顯高于DPC4陰性組（P0.05）。結論DPC4的低表達可能是肺癌發(fā)生過程的早期事件.freelalocus4，DPC4)是一種新的腫瘤抑制基因，其首先由HahnSA等1于1996年在Science上報道，其蛋白產物Smad4是轉化生長因子β(

3、TGFβ)超家族受體的直接底物，而TGFβ具有抑制細胞生長和腫瘤轉移等多種功能2，最近的研究顯示DPC4除了在TGFβ信號傳導途徑中的中心作用以外，還具有一些獨立于TGFβ的功能。如DPC4具有調節(jié)細胞粘附和侵入的潛在功能，以及抑制腫瘤組織的血管增殖和促進凋亡等3。但DPC4在NSCLC中的表達尤其與腫瘤微血管形成和凋亡的關系，國內外相關報道甚少。本研究應用免疫組化SP法檢測了52例肺癌組織和19例相應的癌旁正常組織DPC4基因的蛋白表達，以探討其在肺癌發(fā)病機制中的作用及其與微血管形成和凋亡的關系，為今后以DPC4基因為靶點對肺癌進行基因治療提供理論依據。1材料與方法1.1標本來源標本

4、來自湖北省腫瘤醫(yī)院和武漢大學附屬醫(yī)院2000年3月至2003年7月肺癌手術患者52例，其中鱗癌25例，腺癌27例。高分化癌14例，中分化癌18例，低分化癌20例。伴淋巴結轉移17例。另取癌旁正常肺組織19例。全部標本經10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，制成4μm厚連續(xù)切片。1.2試劑和方法鼠抗人DPC4、VEGF和CD34單克隆抗體購自MaximBio公司，均為即用型。免疫組化SPKit為MaximBio公司產品。實驗步驟按試劑盒說明進行，用PBS代替一抗作陰性對照，以已知陽性片作陽性對照，用DAB顯色，蘇木精復染。1.3免疫組織化學結果判斷DPC4和VEGF陽性顆粒主要分布于

5、正常支氣管上皮細胞和腫瘤細胞的胞漿（見圖1、2），以細胞漿內出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性。顯微鏡下觀察DPC4和VEGF蛋白的分布、陽性強度和陽性率。先按染色強度打分：0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色，染色強度需與背景著色相對比；再按陽性細胞所占百分比打分：0分為陰性，1分為陽性細胞≤10%，2分為11%～50%，3分為51%～75%，4分為＞75%，染色強度與陽性細胞百分比的乘積≥2分為免疫反應陽性（+）。MVD計數(shù):按照VD(±s)，微血管判斷標準是以腫瘤區(qū)內染成棕黃色單個內皮細胞或內皮細胞簇，均作為一個血管計數(shù)，若有管腔大于8個紅細胞大小及帶有較厚肌層的血管或

6、壞死區(qū)域的血管均不予計數(shù)。1.4細胞凋亡檢測采用改良的TdT介導的dUTPbiotin切口末端標記原位檢測法。標記液及抗體購自德國BoehringerMannhein公司。凋亡陽性染色位于細胞核,呈棕黃色。主要表現(xiàn)為核濃縮或核質呈均勻的染色,染色質邊聚,無白細胞浸潤（見圖3）。隨意挑選10個高倍鏡視野下陽性細胞與總細胞比值為AI。1.5統(tǒng)計學處理采用SPSS（11.5版）進行統(tǒng)計學分析，DPC4的表達與不同臨床病理參數(shù)的關系采用χ2和Fisher’s精確檢驗，DPC4和VEGF的關系采用Spearman相關分析，DPC4與MVD和AI的關系采用t檢驗。2結果2.1NSCLC中DPC4

7、的表達DPC4在癌旁正常肺組織和肺癌原發(fā)灶中的陽性表達率分別為89.5%(17/19)、63.5%(33/52)(P＜0.05）。由表1可知，在肺腺癌中DPC4的陽性率明顯高于肺鱗癌，但P0.05；隨著分化程度的降低，DPC4的陽性表達率呈下降趨勢，但P0.05；有淋巴結轉移的肺癌組DPC4陽性率顯著低于無淋巴結轉移組P＜0.001。表1NSCLC中DPC4的表達與臨床病理特征的關系2.2NSCLC中DPC4表達同VEGF表達和MVD間的關系V