不同變異類型裕丹參中丹參酮ⅱa及丹酚酸b含量的比較研究論文

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1、不同變異類型裕丹參中丹參酮ⅡA及丹酚酸B含量的比較研究論文張紅瑞李志敏高致明曹金斌【摘要】目的對(duì)人工栽培群體不同變異類型裕丹參中丹參酮ⅡA和丹酚酸B的含量進(jìn)行分析，遴選優(yōu)良的變異類型，為裕丹參優(yōu)良品種選育提供理論依據(jù)。方法采用HPLC法，以丹參酮ⅡA和丹酚酸B含量為檢測指標(biāo)，對(duì)變異類型裕丹參藥材樣品進(jìn)行比較分析。結(jié)果丹參酮ⅡA和丹酚酸B在各變異類型丹參藥材中的量存在較大差異。小葉型丹參酮ⅡA含量較高，三葉型丹酚酸B含量較高。結(jié)論裕丹參表型的變異已經(jīng)引起了化學(xué)成分的變化，可以通過遴選優(yōu)良的變異類型，培育高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)的裕丹參栽培品種。【關(guān)鍵詞】變異類型丹參丹參酮ⅡA丹酚酸B丹參Sal

2、viamiltiorrhizaBge.為唇形科鼠尾草屬植物.freeliltiorrhizaBge.因其根色澤紫紅，品質(zhì)優(yōu)良，生長在古裕州（今河南省方城縣），質(zhì)量優(yōu)于全國各地同類產(chǎn)品，成為一種道地產(chǎn)品而得名。由于丹參是常異花授粉植物［2，3］，在其分布區(qū)內(nèi)，由于突變、隔離及自然選擇等原因，會(huì)分化出種內(nèi)有差別的地理生態(tài)種群，主要表現(xiàn)在形態(tài)、解剖、生長發(fā)育以及藥用有效成分含量等方面的變異［4，5］。本實(shí)驗(yàn)以栽培管理措施一致的人工栽培群體中不同變異類型的裕丹參為研究對(duì)象，采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)不同變異類型裕丹參中丹參酮ⅡΑ和丹酚酸B含量進(jìn)行分析，揭示不同變異類型裕丹參與有效

3、成分的相關(guān)性，篩選優(yōu)良的變異類型，為裕丹參優(yōu)良栽培品種的選育提供理論依據(jù)。1器材藥材為200508采自河南省方城縣裕丹參仿野生撫育園種質(zhì)資源圃不同變異類型的丹參，由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)高致明教授鑒定。poonsilC18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)；BP211D型電子分析天平；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器。丹參酮ⅡA和丹酚酸B對(duì)照品均購自中國藥品生物制品檢定所。甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。2方法2.1變異類型的劃分以文獻(xiàn)［6］為依據(jù)，選擇容易觀察的葉數(shù)、頂生葉大小、葉色等3項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行裕丹參變異類型的劃分，設(shè)定莖生葉多7葉為多葉，多3葉為3葉。

4、植株中部功能葉片頂生葉長大于7.0cm，寬大于4.0cm為大葉；長小于3.5cm，寬小于2.0cm為小葉。共劃分4個(gè)類型，類型名稱見表1。取樣時(shí)分株進(jìn)行編號(hào)，測定。測定部位均為主根。2.2丹參酮ⅡAHPLC分析條件［1］及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備流動(dòng)相為甲醇-水(75∶25)；體積流量0.8ml/min；檢測波長270nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣量10μl。配制濃度分別為7.5，12.5，25.0，37.5和50.0μg/ml的丹參酮ⅡA對(duì)照品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為橫坐標(biāo)(X)，以濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(Y)，并進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=3.67×106X－8.43

5、×103(r=0.9996)。樣品平均加樣回收率為98.31%，RSD為1.76%。表1丹參不同變異類型形態(tài)特征（略）2.3丹酚酸BHPLC分析條件［1］及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；體積流量0.8ml/min；檢測波長286nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣量10μl。配制濃度分別為5.0，10.0，15.0，20.0和25.0μg/ml的丹酚酸B對(duì)照品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積為橫坐標(biāo)(X)，以濃度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(Y)，并進(jìn)行線性回歸，回歸方程為：Y=5.29×104X－2.43×103(r=0.9993)。樣品平均加樣回收率為98

6、.81%，RSD為1.47%。2.4統(tǒng)計(jì)處理用SPSS11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。LSD法分析變異類型間丹參酮ⅡA和丹酚酸B含量差異。3結(jié)果與分析各類型藥材中丹參酮ⅡA和丹酚酸B含量見表2，方差分析結(jié)果見表3。3.1丹參酮ⅡA含量比較4個(gè)類型藥材樣品中丹參酮ⅡA含量變化較大，在0.38％～0.99％，平均為0.63％。含量最高的是小葉型為0.99％，超過《中國藥典》規(guī)定的不低于0.2％標(biāo)準(zhǔn)的近5倍。3.2丹酚酸Β含量比較分析結(jié)果顯示，不同類型藥材中丹酚酸Β量變化在3.2％～7.2％，平均為5.62％。其中三葉型丹酚酸Β量最高，超過《中國藥典》規(guī)定的量的近2.5倍。含量最低的是小葉

7、型。4討論丹參酮ⅡA和丹酚酸B是丹參中主要活性成分，其量的高低可以判斷丹參藥材質(zhì)量的優(yōu)劣。上述研究結(jié)果表明，不同變異類型裕丹參中兩者的平均量分別達(dá)到了《中國藥典》2005年版Ⅰ部中規(guī)定的0.2％，3.0％的最低標(biāo)準(zhǔn)。但是，方差分析的結(jié)果顯示，不同變異類型裕丹參藥材中丹參酮ⅡA及丹酚酸B的量變化較大。從有效成分量的高低角度看，小葉型可以作為優(yōu)良變異類型定向培育高丹參酮ⅡA裕丹參栽培品種，三葉型可以作為優(yōu)良變異類型定向培育高丹酚酸B裕丹參栽培品種。表2不同變異類型丹參藥材中丹參酮ⅡΑ和丹酚酸Β量