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《fak的阻斷對mhcc97肝癌細(xì)胞侵襲性的影響論文》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、FAK的阻斷對MHCC97肝癌細(xì)胞侵襲性的影響論文.freelacells.MethodsOligofecTAMINE-mediatedantisenseFAKODNacells.Theinvasiveactivityoftumorcellsberhasbeendealed.ResultsAntisenseFAKODNandGenisteincanbothdecreasetheinvasionofMHCC97hepatocellularcarcinomacells.ConclusionInhibitionofFAK
2、expressioncaninhibittheinvasionabilityofMHCC97hepatocellularcarcinomacells.【Keyacell；invasion肝癌嚴(yán)重威脅著人類的健康，在中國肝癌的發(fā)病率一直呈逐年上升趨勢。我國每年約11萬人死于肝癌.freela公司。Matrigel膠購于BDBiosciences公司。1.2OligofecTAMINE介導(dǎo)的反義FAKODN轉(zhuǎn)染反義FAKODN5’-ATAATCCAGCTTGAACCAAG-3’。由上海生工生物工程公司DNA合成，全硫代
3、修飾，聚丙烯酰胺凝膠電泳純化，凍存。OligofecTAMINE按產(chǎn)品說明書介導(dǎo)轉(zhuǎn)染培養(yǎng)細(xì)胞。對照組只加入脂質(zhì)體不加入反義FAKODN。1.3Genistein抑制FAK磷酸化以10μg/ml的終濃度加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，并使DMSO終濃度為0.4%。實(shí)驗(yàn)對照組以同樣終濃度為0.4%的溶劑處理。1.4細(xì)胞體外侵襲能力檢測法Trans孔徑）黏附于Transl，加入濾膜上表面（5μg/濾膜），室溫下通風(fēng)櫥中干燥過夜。用前Matrigel以40μl無血清培養(yǎng)基重建20min后備用。將行不同預(yù)處理后的細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基洗3次，
4、0.25%胰蛋白酶消化，重懸于含0.1%BSA的培養(yǎng)基中，取2×106/ml細(xì)胞100μl加入至上室，600μl0.1%小牛血清培養(yǎng)基加入下室。37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)20h后，濾膜用甲醇固定5min，行Gimsa染色。去除濾膜上層細(xì)胞，顯微鏡下（×320）計(jì)數(shù)濾膜下表面細(xì)胞數(shù)，隨機(jī)計(jì)數(shù)5個視野中的細(xì)胞數(shù)目，每個標(biāo)本重復(fù)2次，實(shí)驗(yàn)重復(fù)2次，以侵襲細(xì)胞的相對數(shù)目來表示腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用t檢驗(yàn)。2結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染反義FAKODN和經(jīng)Genistein處理后的MHCC97肝癌細(xì)胞穿透Matrig
5、el膠處理后的TransamotoH，ItohF，AdachiY，etal.Relationofenhancedsecretionofactivematrix，metalloproteinasesorspreadinhumanhepatocellularcarcinoma.Gastroenterology，1997，112：1290-1296.2AgochiyaM，BruntonVG，Oplificationofthefocaladhesionkinasegeneinhumancancercells.Oncogen
6、e，1999，18：5646-5653.3SchlaepferMD，ParsonsJT.Focaladhesionkinaseandassociatedprotein.CurrOpinCellBiol，1994，6(5)：705-710.4DavidDS，ChristofRH，DavidJS.Signalingthroughfocaladhesionkinase.ProgBiophyMolBiol，1999，71：435-478.5KumarCC.Signalingbyintegrinreceptors.Oncog
7、ene，1998，17(11)：1365-1373.6AyakiM，KomatsuK，MukaiM，etal.Reducedexpressionoffocaladhesionkinaseinlivermetastasesparedatchedprimaryhumancolorectaladenocarcinomas.ClinCancerRes，2001，7(10)：3106-3112.7BruntonVG，F(xiàn)inchamVJ，McLeanGentofintegrin-dependentadhesionincolon
8、epithelialcellsrequireFAK-andERk-mediatedactinspikeformation：deregulationincancercells.Neoplasia，2001，3(3)：215-226.8SiegDJ，HauckCR，SchlaepferDD.Requiredroleoffocaladhesionkinase(FA
