干擾素α對(duì)u937細(xì)胞的促凋亡和抗增殖作用及其機(jī)制

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1、干擾素α對(duì)U937細(xì)胞的促凋亡和抗增殖作用及其機(jī)制【摘要】為了研究干擾素α對(duì)白血病細(xì)胞U937細(xì)胞的抗增殖作用及其機(jī)制，用不同濃度的干擾素α(500U/L、1000U/L、2000U/L、3000U/L、4000U/L)對(duì)U937細(xì)胞作用不同時(shí)間（0、12、24、36和48小時(shí)）,用MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長抑制率，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，RTPCR方法分析cyclinEmRNA的表達(dá)。結(jié)果表明：不同濃度的干擾素α處理細(xì)胞后，U937細(xì)胞生長明顯受抑，2000U/L干擾素α能引起細(xì)胞凋亡，凋亡率為25.28%-70.54%（P<0.01），細(xì)胞周

2、期相關(guān)基因cyclinEmRNA表達(dá)降低；干擾素α對(duì)U937細(xì)胞的抑制率,呈濃度時(shí)間依賴性。結(jié)論：干擾素α對(duì)U937細(xì)胞有明顯抗增殖和促凋亡作用，此結(jié)果將為干擾素α在白血病臨床治療方面的應(yīng)用提供有力的實(shí)驗(yàn)證據(jù)?！娟P(guān)鍵詞】干擾素αU937細(xì)胞白血病ApoptosisinducingandAntiproliferationEffectofInterferonαonU937CellsandItsMechanismAbstractThisstudyedtoinvestigatetheantiproliferationeffectofinterferonα(IF

3、Nα)onleukemicU937cellsanditsmechanism．TheU937cellse(0,12,24,36,48hours),theinhibitoryratioeasuredbyMTTassay,apoptosisrateetry(FCM),theexpressionofcellcycleassociatedcyclinEmRNAeasuredbyRTPCR.TheresultsshoRNAexpressiondecreased,thegroeanddosedependentmanner．ItisconcludedthatIFNαha

4、sapparentantiproliferationandapoptosisinducingeffectsonU937cells.Theseresultsiatherapy.Keyia干擾素α是目前用于臨床治療最重要的細(xì)胞因子之一。它具有廣泛多變的生物學(xué)作用，諸如免疫調(diào)節(jié)、抗感染、抗病毒作用，尤其是對(duì)病毒性肝炎具有良好的治療作用［1］。最新研究表明，干擾素α是一種非常有效的抗腫瘤細(xì)胞因子，并且對(duì)許多惡性疾病，例如肺癌、慢性粒細(xì)胞白血病均有顯著效果［2］。干擾素α雖然已經(jīng)廣泛用于各種惡性腫瘤，但其抗腫瘤機(jī)制還不清楚。干擾素α可能間接地通過調(diào)節(jié)免疫調(diào)制和抗血管生長

5、反應(yīng)或直接通過影響腫瘤細(xì)胞的增殖和細(xì)胞分化來介導(dǎo)抗腫瘤作用。干擾素α的直接和間接作用都是由干擾素刺激基因（IFNtimulatedgene,ISG)亞群誘導(dǎo)引起的。除此之外，還有ISGS還具有致凋亡作用［3，4］。為了闡明干擾素α的抗白血病機(jī)制，我們研究了從500U/L-4000U/L的各種濃度干擾素α在體外對(duì)U937細(xì)胞的抗增殖作用和促凋亡作用，并檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)基因cyclinEmRNA的變化，為干擾素α的白血病臨床治療提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。材料和方法藥物干擾素α購自基因公司。U937細(xì)胞購自中國細(xì)胞培養(yǎng)中心。cyclinE抗體購自晶美公司。細(xì)胞培養(yǎng)人類白血病

6、細(xì)胞U937細(xì)胞株接種于含有10%滅活的胎牛血清、青霉素100U/ml及鏈霉素100U/ml的RPMI1640培養(yǎng)液中，于37℃、5%CO2、飽和濕度下培養(yǎng),每2周傳代1次并常規(guī)檢查是否有支原體污染。中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志JExpHematol2007;15(1)干擾素-α對(duì)U937細(xì)胞的抗增殖作用及其機(jī)制細(xì)胞增殖抑制率的MTT比色法檢測(cè)取對(duì)數(shù)生長期的U937細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞濃度為5×105/ml，置于96孔培養(yǎng)板,每孔加入上述細(xì)胞懸液100μl。將不同濃度的干擾素α（500、1000、2000、3000及4000U/L）加入不同的孔中,另選1組作為對(duì)照組。每種藥物濃度

7、為1組,每組設(shè)6個(gè)平行孔。培養(yǎng)12、24、36和48小時(shí)后從培養(yǎng)箱中取出96孔培養(yǎng)板,然后每孔加入MTT(5mg/ml)10μl,再培養(yǎng)4小時(shí)后取出,離心吸去上清液,每孔加入DMSO100μl,充分溶解。選擇490nm波長，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)定各孔A值。計(jì)算公式為：腫瘤細(xì)胞的生長抑制率=（1-實(shí)驗(yàn)組平均A值/對(duì)照組平均A值）×100%。細(xì)胞凋亡的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)收集經(jīng)不同濃度干擾素α、不同處理時(shí)間的U937細(xì)胞,以PBS緩沖液清洗后再將細(xì)胞沉淀充分混勻,用PBS緩沖液重懸,加入200mg/L去DNA酶的RNA酶,流式細(xì)胞儀分析不同DNA含量的細(xì)胞分布。應(yīng)用Mod