hif1α和vegf的表達(dá)與肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系論文

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1、HIF1α和VEGF的表達(dá)與肝細(xì)胞癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系論文吳曉慧，王順祥，李建坤，彭利，張萌，肖冰【摘要】目的探討HIF1α、VEGF的蛋白表達(dá)與肝細(xì)胞癌血管新生及侵襲轉(zhuǎn)移特性之間的關(guān)系。方法采用免疫組化SP法檢測(cè)肝細(xì)胞癌、癌旁肝組織和正常肝組織中HIF1α、VEGF的表達(dá)，并計(jì)數(shù)MVD值。結(jié)果HIF1α在肝細(xì)胞癌中的陽性表達(dá)率為50.0%，顯著高于癌旁（16.1%）和正常肝組織的（8.3%）（P=0.001）；VEGF在肝細(xì)胞癌中的陽性表達(dá)率為80%.freela325(16.1)*0.00119(59.4)*0

2、.04417.08±9.31*0.001Normallivertissue121(8.3)*5(41.7)*15.22±6.38**paredondson分級(jí)法，其中Ⅰ、Ⅱ級(jí)29例，Ⅲ、Ⅳ級(jí)21例。另32例癌旁組織取自距肝癌組織邊緣2cm以上的肝組織，12例正常組織作為對(duì)照。所有標(biāo)本均用10%甲醛固定。1.2實(shí)驗(yàn)方法鼠抗人HIF1α為美國(guó)LABVISION公司產(chǎn)品，兔抗人VEGF為SantaCruz公司產(chǎn)品，兔抗人VIII因子相關(guān)抗原多克隆抗體為北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。固定好的組織標(biāo)本脫水，石蠟包埋，常規(guī)病

3、理切片，4μm厚，HE染色，由有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師診斷核實(shí)，選取含腫瘤組織標(biāo)本的蠟塊，采用常規(guī)免疫組化SP法進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，同時(shí)設(shè)陽性和陰性對(duì)照：陽性對(duì)照為試劑公司提供的強(qiáng)陽性標(biāo)本切片，陰性對(duì)照采用磷酸鹽緩沖溶液(PBS)代替一抗。1.3免疫組化結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)按Shimizu方法，對(duì)每張切片陽性細(xì)胞的陽性強(qiáng)度按無著色、淡黃色、棕黃色和棕褐色分別記0、1、2、3分，著色陽性面積按無著色、著色1/3、1/3～2/3、2/3分別記0、1、2、3分，然后根據(jù)兩項(xiàng)記分之和判斷其結(jié)果：≥3分為陽性。1.4MVD結(jié)果判定MVD計(jì)

4、數(shù)方法：采用VD值的組間顯著性差異采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)。P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1不同肝組織中HIF1α和VEGF蛋白的表達(dá)及MVD值肝癌組織中HIF1α陽性著色主要分布于細(xì)胞漿，小部分胞核中也有表達(dá)，分化程度越低著色程度越深，HIF1α在正常肝組織和癌旁肝組織胞漿中無著色或著色較淺，見圖1~4。VEGF主要定位在胞漿，正常肝組織中無VEGF染色或染色較淺；不同分化程度的肝癌組織VEGF染色差別不明顯，見圖5~8。肝癌組織微血管染色數(shù)多于癌旁和正常肝組織，見圖9~11。HIF1α和VEGF

5、在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)顯著高于癌旁和正常肝組織（P0.05）；肝癌組織MVD值顯著高于癌旁和正常肝組織（P0.05），見表1。2.2HIF1α和VEGF蛋白表達(dá)及其與MVD的關(guān)系在肝細(xì)胞癌組織中HIF1α和VEGF陽性表達(dá)組MVD值均顯著高于陰性表達(dá)組，且HIF1α和VEGF共同表達(dá)陽性組的MVD值高于HIF1α和VEGF共同表達(dá)陰性組（P0.05），見表2；HIF1α和VEGF蛋白的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（P0.05），見表3。表2肝癌組織中HIF1α和VEGF的表達(dá)與MVD的關(guān)系casesMVDtPHIF1αp

6、ositive2530.28±10.09negative2523.56±11.532.190.033VEGFpositive4029.03±10.50negative1020.07±4.842.840.007HIF1α/VEGFpositive2430.71±10.08negative918.30±4.293.550.001表3肝癌組織中HIF1α和VEGF表達(dá)的關(guān)系VEGFHIF1αpositivenegativeχ2Ppositivenegative2411698.000.0052.3HIF1α和VEGF蛋

7、白表達(dá)與肝細(xì)胞癌病理特征的關(guān)系HIF1α蛋白表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、有無肝內(nèi)或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和AFP等無關(guān)（P0.05），但與有無門靜脈或膽管癌栓及腫瘤的分化程度有關(guān)（P0.05）；VEGF蛋白表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、AFP及腫瘤分化程度等無關(guān)（P0.05），但與有無肝內(nèi)或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無門靜脈或膽管癌栓有關(guān)（P0.05），見表4。表4肝癌組織中HIF1α和VEGF的表達(dá)及其與肝癌臨床病理特征的關(guān)系3討論缺氧是實(shí)質(zhì)性腫瘤微環(huán)境的基本特征之一，缺氧狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)缺氧反應(yīng)基因（VEGF、紅細(xì)胞生成素、酪氨酸

8、羥化酶及參與糖酵解的酶類）轉(zhuǎn)錄和表達(dá)發(fā)生改變，從而對(duì)缺氧作出應(yīng)激反應(yīng)，使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生一系列適應(yīng)性變化2。缺氧反應(yīng)基因的調(diào)控主要是由HIF1來實(shí)現(xiàn)。HIF1α極不穩(wěn)定，易被蛋白酶降解，常氧條件下半衰期小于10min，但在缺氧時(shí)半衰期顯著延長(zhǎng)。HIF1α決定HIF的活性，在腫瘤組織中廣泛表達(dá)。Zhong等3分析179例腫瘤標(biāo)本后