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《缺氧下絨癌jeg-3細(xì)胞hif-1α及vegf的表達(dá)及其對(duì)侵襲能力的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、中圖分類號(hào)R711UDC610碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼10533缺氧下絨癌,IEG．3細(xì)胞HIF．1a及ⅦGF的表達(dá)及其對(duì)侵襲能力的影響TheexpressionsofHIF··1alphaandVEGFandtheeffectoninvasivenessinhumanchoriocarcinomaJEG--3celllineinHypoxiccondition作者姓名：李林夕學(xué)科專業(yè)：臨床醫(yī)學(xué)研究方向：婦產(chǎn)科學(xué)學(xué)院(系、所)：湘雅醫(yī)院指導(dǎo)教師：劉惠寧教授論文答辯日期塑f蘭苧!巧答辯委員會(huì)主席中南大學(xué)二零一三年五月原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論
2、文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明。作者簽名：塹撾日期：盤12年』月叢日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同
3、時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。缺氧下絨癌JEG．3細(xì)胞HIF．1Q及VEGF的表達(dá)及其對(duì)侵襲能力的影響摘要目的觀察氯化鉆(CoCl2)在體外模擬缺氧對(duì)絨癌JEG．3細(xì)胞增殖能力的影響，進(jìn)而確立合適的絨癌JEG．3細(xì)胞的體外缺氧模型。并在該缺氧模型基礎(chǔ)上觀察不同程度缺氧對(duì)絨癌JEG-3細(xì)胞侵襲能力的影響，并探討可能的影響機(jī)制。方法(1)經(jīng)不同濃度的COCl2(O、50、100、150、200lgnol／L)和不同作用時(shí)間(24h、48h、72h、96h)培養(yǎng)誘導(dǎo)絨癌JE
4、G．3細(xì)胞缺氧，用CCK．8法檢測(cè)缺氧對(duì)絨毛膜癌JEG．3細(xì)胞增殖活性的影響。(2)1501amol／1濃度的CoCl2分別作用絨癌JEG．3細(xì)胞24h、48h、72h建立絨癌JEG．3細(xì)胞體外缺氧模型。運(yùn)用熒光定量．聚合酶鏈反應(yīng)(realtime-polymerasechainreaction，realtime．PCR)及蛋白免疫印跡(Westemblotting)方法，分別檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組絨癌．1EG．3細(xì)胞的HIF．1a及VEGF的mRNA和蛋白水平的表達(dá)；運(yùn)用transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組絨癌JEG．3細(xì)胞的侵襲能力。結(jié)果(1)用C
5、CK-8測(cè)定在不同濃度CoCl2作用不同時(shí)間下的絨癌JEG．3細(xì)胞的增殖活性。結(jié)果示在一定濃度下(<150眥aol／1)和作用II時(shí)間(72h)范圍內(nèi)，CoCl2誘導(dǎo)的缺氧可以一定程度的促進(jìn)絨癌JEG一3細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖，并呈濃度和時(shí)間的正相關(guān)性；而當(dāng)作用濃度增加(達(dá)至02009rnol／1)或延長(zhǎng)處理時(shí)間(96h)時(shí)均會(huì)不同程度的降低JEG．3細(xì)胞的增殖活性。(2)real．time．PCR檢測(cè)結(jié)果示缺氧不能刺激HIF．10tmRNA的表達(dá)增加。缺氧24h組、缺氧48h組、缺氧72h組的HIF—lotrnRNA的表達(dá)分別為常氧對(duì)照組的HIF—l
6、otmRNA表達(dá)的1．17倍、O．98倍、1．04倍。HIF．10t的下游重要靶基因VEGF隨著誘導(dǎo)缺氧時(shí)間的延長(zhǎng)(24h、48h、72h)其mRNA表達(dá)水平逐漸增高。缺氧24h組、缺氧48h組、缺氧72h組的VEGFmRNA的表達(dá)分別為常氧對(duì)照組VEGFmRNA表達(dá)的2．62倍、4．79倍、5．66倍。(3)蛋白免疫印跡Westernblotting檢測(cè)結(jié)果示在缺氧下HIF-lot及VEGF蛋白水平的表達(dá)均增強(qiáng)。HIF．1a在缺氧24h時(shí)的蛋白表達(dá)相對(duì)灰度值為(0．42+0．01)，并在缺氧48h時(shí)蛋白表達(dá)最高。缺氧48h組(0．64士0．0
7、3)與缺氧72h組(0．65+0．02)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>o．05)。各缺氧組與常氧組(0．26+0．01)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0．05)。絨癌JEG．3細(xì)胞中VEGF蛋白水平的表達(dá)隨著缺氧時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)逐漸增強(qiáng)。其中，常氧組VEGF蛋白表達(dá)灰度值為(0．28+0．02)，缺氧24h組為(0．46+0．02)，缺氧48h組為(O．94+0．03)，缺氧72h組為(1．26+0．02)。各缺氧組與常氧組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0．05)。缺氧各組分別與其前一缺氧時(shí)間組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0．05)。III(4)Trans
8、well侵襲實(shí)驗(yàn)測(cè)缺氧下絨癌JEG．3細(xì)胞侵襲力的變化。Transwell結(jié)果顯示在400x下觀察．1EG．3細(xì)胞的穿膜細(xì)胞數(shù)分別為常氧對(duì)照組(31士
