pda培養(yǎng)基的配制方法

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1、PDA培養(yǎng)基的配制方法一、目的要求1．學(xué)習(xí)并掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。2．學(xué)習(xí)并掌握棉塞的制作方法。二、培養(yǎng)基的配制原理培養(yǎng)基是人工配制的各種營養(yǎng)物質(zhì)供微生物生長繁殖的基質(zhì)，用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存各種微生物或積累代謝產(chǎn)物。在自然界中，微生物種類繁多，營養(yǎng)類型多樣，加上實(shí)訓(xùn)和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，但不論是何種培養(yǎng)基，均應(yīng)含有水分、碳源、氮源、能源、無機(jī)鹽等。不同微生物對(duì)pH值要求不一樣，所以配制培養(yǎng)基時(shí)，還應(yīng)根據(jù)不同微生物對(duì)pH值的要求，將培養(yǎng)基調(diào)到合適的pH值范圍。三、實(shí)訓(xùn)材料和用具瓊脂，可溶性

2、淀粉，葡萄糖，10﹪NaOH，10﹪HCl，1mol／LNaOH，lmol／LHCl，KNO3，NaCl，K2HPO4·3H20，MgSO4·7H20，F(xiàn)eSO4·7H2O；試管，三角瓶，燒杯，量筒，玻璃棒，天平，牛角匙，PH試紙，棉花，牛皮紙，記號(hào)筆，紗布，四、操作方法與步驟(一)培養(yǎng)基的配制PDA培養(yǎng)基的配制其配方如下：土豆200g，葡萄糖20g，瓊脂15～20g，水1000mL，pH值自然。(1)稱量和熬煮藥品實(shí)際用量計(jì)算后，按培養(yǎng)基配方逐一稱取去皮土豆。土豆切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰

3、，維持20－30min，用可用2層紗布趁熱在量杯上過濾，濾渣棄取。濾液補(bǔ)充水分到1000ml。(2)加熱溶解把濾液放入鍋中，加入葡萄糖20g，瓊脂15～20g（提前搞碎），然后放在石棉網(wǎng)上，小火加熱，并用玻棒不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，待瓊脂完全溶解后，再補(bǔ)充水分至所需量。(3)分裝按實(shí)訓(xùn)要求，將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或500ml三角瓶內(nèi)。分裝時(shí)可用三角漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上造成污染。分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度的1／5，滅菌后制成斜面，分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容積的一半為宜；半固體培養(yǎng)基以試管高度的1／3

4、為宜，滅菌后垂直待凝。(4)加棉塞培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或試管帽等)，以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)造成污染，并保證有良好的通氣性能。(5)包扎加塞后，將全部試管用麻繩或橡皮筋捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時(shí)冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道線繩或橡皮筋扎好，用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。(二)棉塞的制作棉塞的作用有二：一是防止雜菌污染；二是可過濾空氣，保證通氣良好，并可減緩培養(yǎng)基水分的蒸發(fā)，所以正確地制備棉塞是培養(yǎng)基制備中重要的一環(huán)。正確的棉塞是形狀、大小，松緊應(yīng)與試

5、管口(或三角燒瓶)完全適合。過緊則妨礙空氣流通，操作不便；過松時(shí)，空氣會(huì)毫無障礙地進(jìn)入試管(或三角燒瓶)中，達(dá)不到滅菌的目的。棉塞過小往往易掉進(jìn)試管內(nèi)，因此棉塞質(zhì)量的優(yōu)劣對(duì)實(shí)訓(xùn)的結(jié)果有很大的影響。正確的棉塞頭較大，加塞時(shí)，應(yīng)使棉塞長度的1／3留在試管口外，2／3在試管口內(nèi)（見實(shí)訓(xùn)圖6-4）。目前，有條件的實(shí)訓(xùn)室已使用堅(jiān)固的塑料試管帽、金屬試管帽、硅膠泡沫塞替代棉塞，制作棉塞要選纖維較長的棉花，一般不選用脫脂棉。因?yàn)樗菀孜儩?，造成污染，而且價(jià)格也貴。棉塞制作方法見圖6-5實(shí)圖6-4棉塞實(shí)圖6-5棉塞的制作方法（三）斜

6、面與平板培養(yǎng)基的制作斜面與平面培養(yǎng)基是常用的瓊脂固體培養(yǎng)基。將熬制好的瓊脂培養(yǎng)基趁熱裝入試管滅菌后擺鞋面，凝固后即成斜面培養(yǎng)基。斜面培養(yǎng)基常用于菌種培養(yǎng)、菌種保藏等工作。將滅菌后的瓊脂培養(yǎng)基傾注于無菌培養(yǎng)皿中，凝固后即成平板培養(yǎng)基。平板培養(yǎng)基常用于分離菌種、菌落計(jì)數(shù)、菌落形態(tài)觀察及菌種鑒定等。斜面與平板培養(yǎng)基的制作過程大致為：溶解原料、融化瓊脂、調(diào)PH、分裝、滅菌和制斜面或平板。1、溶解原料為加速原料的溶解，最好用熱水。先將原料依次加入到占配制量一半的水中，待全部溶解后在加足水量。如配方中有馬鈴薯、麩皮、胡羅卜、豆芽等天

7、然原料，需將其熬制約30min，取出定量濾液，在將所需的其他原料加入濾液中。2、融化瓊脂瓊脂的用量可靈活掌握。用作保藏菌種的培養(yǎng)基，瓊脂用量可提高至2.5%，以增加持水性。冬季的氣溫低，瓊脂用量可適當(dāng)減少。瓊脂用前可剪成小段，以利于融化。待溶液煮沸是再加入，不斷攪拌至完全無瓊脂塊狀物時(shí)再停止加熱。3、調(diào)整PH用潔凈干燥的玻璃棒沾一點(diǎn)培養(yǎng)基滴在試紙上，立即與比色板比較。一般用10%NaOH或HCl調(diào)節(jié)。4、分裝將培養(yǎng)基趁熱倒入墊有紗布的漏斗中，使培養(yǎng)基直接濾至試管或三角瓶中，試管裝量一般為管高的1/4左右，三角瓶的裝量約為

8、其容量的一半。勿使培養(yǎng)基玷污容器口部?？诓咳忻奕嚬苊?或9支扎一捆，棉塞外面包牛皮紙，以防在滅菌過程中被水汽打濕。5、滅菌分裝后的培養(yǎng)基應(yīng)隨即滅菌。除特殊情況外，一般培養(yǎng)基均用高壓蒸汽滅菌，在104kPa壓力下，滅菌20-30min。6、制作斜面或平板將滅菌后的試管趁熱斜置于棍條上，傾斜度以試管中的培養(yǎng)基約占試